在液相分析過程中，你是否會(huì)遇到過峰前延、色譜峰展寬，分叉等現(xiàn)象？在進(jìn)行原因排查時(shí)，我們可能會(huì)逐一排查系統(tǒng)、色譜柱、儀器等發(fā)現(xiàn)都正常，百思不得其解，最后才發(fā)現(xiàn)問題出現(xiàn)在“溶劑效應(yīng)”這個(gè)隱形的殺手上。所以，本期小析姐帶大家看看液相分析中溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生原因及應(yīng)對(duì)的策略方法，希望對(duì)大家有所幫助！

一、溶劑效應(yīng)是怎么回事？

通常情況下對(duì)于溶劑效應(yīng)理解為：樣品溶劑洗脫強(qiáng)度大于流動(dòng)相洗脫強(qiáng)度時(shí)產(chǎn)生的色譜峰變形的現(xiàn)象。

舉例說明：如用100%乙腈溶解樣品，注入到流動(dòng)相為乙腈-水(18:82)的反相系統(tǒng)中，會(huì)造成峰分叉結(jié)果(如圖A)。而采用流動(dòng)相溶解樣品，在注入到流動(dòng)相中，峰形恢復(fù)成正常(如圖B)。

用通俗的話來(lái)描述，溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生是由于樣品溶劑與流動(dòng)相不匹配引起的。但是這種概念不能解釋其他由于所選稀釋劑導(dǎo)致的峰變形的異?，F(xiàn)象。

所以，有研究資料對(duì)“溶劑效應(yīng)”的概念進(jìn)行延伸，指出溶劑效應(yīng)是由于供試品中特定組分在稀釋劑與流動(dòng)相中所處狀態(tài)的差異對(duì)色譜行為的不利影響。如果這種不利影響較為嚴(yán)重，則可能造成明顯的色譜行為異常，如峰分叉、拖尾等。

二、為什么會(huì)產(chǎn)生及危害？

（一）溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生在液相分析中，進(jìn)樣過程可分為三個(gè)階段：

第一個(gè)階段：是樣品到達(dá)色譜柱。

第二個(gè)階段：是樣品部分進(jìn)入色譜柱。

第三個(gè)階段：是樣品全部進(jìn)入色譜柱。

而溶劑效應(yīng)主要產(chǎn)生于進(jìn)樣過程的第二個(gè)階段，即樣品部分進(jìn)入色譜柱。在第二階段中，溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生機(jī)理可以用三部分進(jìn)程來(lái)進(jìn)行剖析：

●進(jìn)程1：樣品剛被注入系統(tǒng)，進(jìn)入色譜柱后，流動(dòng)相氛圍中的目標(biāo)物以正常速度被洗脫。因強(qiáng)溶劑洗脫，移動(dòng)速度快，樣品在空間上開始慢慢分裂。

●進(jìn)程2：在一定時(shí)間內(nèi)，溶劑氛圍中的目標(biāo)物移動(dòng)始終快一些，前后兩部分距離擴(kuò)大。但移動(dòng)快的目標(biāo)物所處氛圍逐漸被流動(dòng)相稀釋(注：因?yàn)槿軇┖土鲃?dòng)相均不保留)，其移動(dòng)速度會(huì)逐漸降至正常流速。直到前面目標(biāo)物的氛圍完全被流動(dòng)相替代，前后兩部分的距離穩(wěn)定下來(lái)。所以，樣品溶劑與流動(dòng)相洗脫強(qiáng)度差距越大，兩部分目標(biāo)物最終的距離拉的越大。

●進(jìn)程3：所有目標(biāo)物在色譜柱中正常移動(dòng)，但分裂已不可逆轉(zhuǎn)。

經(jīng)過檢測(cè)器，同一目標(biāo)物給出了兩個(gè)色譜峰。其中進(jìn)柱前即擴(kuò)散進(jìn)入流動(dòng)相的那部分目標(biāo)物組成了后面的色譜峰，它的保留時(shí)間與目標(biāo)物的真實(shí)保留時(shí)間基本吻合。

簡(jiǎn)單概括來(lái)說：強(qiáng)洗脫溶劑不均衡地參與了目標(biāo)物的洗脫，使色譜峰保留時(shí)間整體提前，而樣品因?yàn)樵谥暗牟怀浞謹(jǐn)U散導(dǎo)致了峰形扭曲。這種影響輕則導(dǎo)致峰展寬，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致峰裂分，給樣品的定性和定量帶來(lái)災(zāi)難。

（二）溶劑效應(yīng)的危害

①　導(dǎo)致色譜柱柱效下降，危害分離;

②　危害峰形，危害定量，甚至危害定性;

③　強(qiáng)洗脫的溶劑在基質(zhì)中提取出的雜質(zhì)遇流動(dòng)相會(huì)析出，可能堵塞針座、柱前管路或色譜柱。

三、應(yīng)該怎么解決“它”？

（一）溶劑強(qiáng)度

反相色譜系統(tǒng)中溶劑強(qiáng)度的順序?yàn)椋核?/span>(最弱)<甲醇<乙腈<乙醇<四氫呋喃<丙醇<二氯甲烷(最強(qiáng))

正相色譜系統(tǒng)中溶劑強(qiáng)度的順序?yàn)椋赫和?/span>(最弱)<醇/正己烷混合<乙醇<四氫呋喃當(dāng)溶解樣品的稀釋劑溶劑強(qiáng)度大于能夠洗脫的梯度流動(dòng)相的強(qiáng)度時(shí),就容易導(dǎo)致溶劑效應(yīng)的發(fā)生。

解決辦法：對(duì)于最普遍的溶劑效應(yīng)，解決辦法即調(diào)整稀釋劑或流動(dòng)相，使二者洗脫能力接近，或稀釋劑洗脫能力稍低于流動(dòng)相都是可以的。

一般情況下，為避免溶劑強(qiáng)度差異導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)，反相色譜中較為穩(wěn)妥的做法是稀釋劑與流動(dòng)相保持一致，若流動(dòng)相或流動(dòng)相中的有機(jī)相無(wú)法直接溶解樣品，則用可以溶解樣品的溶劑溶解成高濃度儲(chǔ)備液，然后用流動(dòng)相稀釋至所需濃度。

（二）減小進(jìn)樣體積

當(dāng)樣品溶劑洗脫能力大于流動(dòng)相時(shí)，由于樣品溶劑瞬時(shí)流動(dòng)相的作用，容易產(chǎn)生峰形前延。峰形前延的程度與進(jìn)樣量有關(guān)，進(jìn)樣量越大，前延越厲害，溶劑效應(yīng)越明顯。反之進(jìn)樣量越小，溶劑效應(yīng)也越小。因此減小進(jìn)樣體積能有效削弱或消除溶劑效應(yīng)。

用此方法注意：

①　好峰形的獲得是以犧牲靈敏度為代價(jià)，進(jìn)樣量的減小會(huì)使檢測(cè)靈敏度下降，在目標(biāo)化合物含量本就較低的情況下(如農(nóng)殘和環(huán)境樣品的檢測(cè))，此方案不可取;

②　靈敏度和檢測(cè)限是評(píng)價(jià)一個(gè)方法好與不好的重要指標(biāo)，在萬(wàn)不得已的情況下通常盡量避免減小進(jìn)樣量。

（三）改變樣品的電離狀態(tài)

當(dāng)稀釋劑與流動(dòng)相的pH不一致時(shí)，稀釋劑在流經(jīng)色譜柱時(shí)，會(huì)改變周圍環(huán)境的pH，從而可能改變分析物的電離狀態(tài)進(jìn)而影響其保留行為。通常表現(xiàn)為保留時(shí)間的漂移或不穩(wěn)定?？梢酝ㄟ^將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)至與流動(dòng)相一致，或增大流動(dòng)相的緩沖能力來(lái)改善。

（四）調(diào)整柱前管路

對(duì)于梯度洗脫而言，在不影響分離度的情況下，可以改用較粗內(nèi)徑的柱前管路。

此方法注意：若是等度洗脫，此方法會(huì)降低柱效;若是梯度洗脫，基本不影響柱效。

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