分光光度計屬于精密儀器,應(yīng)當(dāng)妥善保管和精心維護,這樣才能保證分光光度計長期使用、長期的穩(wěn)定可靠、測量精度高。
分光光度計的工作原理
光是一種電磁波,具有一定的波長和頻率??梢姽獾牟ㄩL范圍在400~760nm,紫外光為200~400nm,紅外光為760~500000nm??梢姽庖虿ㄩL不同呈現(xiàn)不同顏色,這些波長在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)不同顏色的光稱單色光。太陽或鎢絲等發(fā)出的白光是復(fù)合光,是各種單色光的混合光。利用棱鏡可將白光分成按波長順序排列的各種單色光,即紅、橙、黃、綠、青、藍、紫等,這就是光譜。有色物質(zhì)溶液可選擇性地吸收一部分可見光的能量而呈現(xiàn)不同顏色,而某些無色物質(zhì)能特征性地選擇紫外光或紅外光的能量。物質(zhì)吸收由光源發(fā)出的某些波長的光可形成吸收光譜,由于物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)不同,對光的吸收能力不同,因此每種物質(zhì)都有特定的吸收光譜,而且在一定條件下其吸收程度與該物質(zhì)的濃度成正比,分光光度法就是利用物質(zhì)的這種吸收特征對不同物質(zhì)進行定性或定量分析的方法。
在比色分析中,有色物質(zhì)溶液顏色的深度決定于入射光的強度、有色物質(zhì)溶液的濃度及液層的厚度。當(dāng)一束單色光照射溶液時,入射光強度愈強,溶液濃度愈大,液層厚度愈厚,溶液對光的吸收愈多,它們之間的關(guān)系,符合物質(zhì)對光吸收的定量定律,即Lambert-Bear 定律。這就是分光光度法用于物質(zhì)定量分析的理論依據(jù)。
分光光度計的使用方法:
(1)儀器預(yù)熱。打開樣品室蓋(光門自動關(guān)閉)。開啟電源,指示燈亮,儀器預(yù)熱20 min。選擇開關(guān)置于“T”旋鈕,使數(shù)字顯示為“00.0”。
(2)旋動波長手輪,把所需波長對準(zhǔn)刻度線。
(3)將裝有溶液的比色皿放置比色架中,令參比溶液置于光路。
(4)蓋上樣品室蓋,調(diào)節(jié)透光率“100%T”旋鈕,使數(shù)字顯示為“100.0T”。(如顯示不到100%T,則可加按一次。
(5)吸光度A的測量:儀器調(diào)T為0和100%后,將選擇開關(guān)轉(zhuǎn)換至A調(diào)零旋鈕,數(shù)字顯示應(yīng)為“.000”。然后拉出拉桿,使被測溶液置入光路,數(shù)字顯示值即為試樣的吸光度A。
(6)測定完畢后,先打開樣品室蓋,再斷電源。比色杯應(yīng)清洗干凈后,再貯放保存。
分光光度計的注意事項
1、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi),使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,室內(nèi)照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng),防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2、使用本儀器前,使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應(yīng)該對儀器的安全性能進行檢查,電源接線應(yīng)牢固,通電也要良好,各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確,然后再按通電源開關(guān)。
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