除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg公式，光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm的“背景”信息，設(shè)定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，較佳的線性范圍在1.0-1.5之間。實(shí)驗(yàn)中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個正常的現(xiàn)象。事實(shí)上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結(jié)果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因?yàn)閃arburg公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大，從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾;另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的混合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
在使用分光光度計(jì)時(shí)，我們必須要注意一些使用后的維護(hù)，保養(yǎng)，和一些基本使用注意事項(xiàng)，才能達(dá)到更好的使用效果。
分光光度計(jì)的使用維護(hù)：
1、使用的吸收池必須潔凈，并注意配對使用。量瓶、移液吸管均應(yīng)校正、洗凈后使用。
2、取吸收池時(shí)，手指應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè)，裝盛樣品以池體的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無溶劑殘留。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測定時(shí)除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰±2nm以內(nèi)，測幾個點(diǎn)的吸收度或由儀器在規(guī)定的波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī)定外吸收度最大波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的測定波長±2nm以內(nèi)。
5、供試品應(yīng)取2份，如為對照品比較法，對照品一般也應(yīng)取2份。平行操作，每份結(jié)果對平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。
6、選用儀器的狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度值會偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，對于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬。
7、單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi)不能拆開,為防止色散元件受潮發(fā)霉,必須經(jīng)常更換單色器盒干燥劑。
8、光電轉(zhuǎn)換元件不能長時(shí)間曝光,應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
由于分光光度計(jì)是一種常用的實(shí)驗(yàn)室分析儀器，款式和價(jià)格都是多樣化的，因此如何選擇一款合適的分光光度計(jì)就顯得尤為重要了。盡管分光光度計(jì)種類繁多，但不外乎：簡易型、中檔型和高檔型三大類。
一、簡易型儀器及其特點(diǎn)：
結(jié)構(gòu)：這種類型的儀器多為單光束型，即只有一束光照射到樣品室內(nèi)；光源一般僅有鎢燈；樣品支架一般為推拉式四聯(lián)池架；波長選擇多為手動查找，重復(fù)性差；狹縫為一個固定寬度模式；光學(xué)性能指標(biāo)較低；檢測器多為光敏二極管；顯示器多為機(jī)械表頭或數(shù)碼管顯示器，數(shù)據(jù)處理器一般沒有。此類儀器生產(chǎn)以國內(nèi)廠家居多。
測量模式：多為定點(diǎn)（固定波長）吸光度或透過率測量方式，基本不能進(jìn)行波長掃描測量。
適應(yīng)范圍：小型實(shí)驗(yàn)室及示范教學(xué)，分析樣品相對簡單，測試結(jié)果精度要求不高。
二、中檔型儀器及其特點(diǎn)：
結(jié)構(gòu)：此類儀器多為雙光束型或準(zhǔn)雙光束型，但也有單光束儀器型；光源有鎢燈和氘燈；樣品池支架為兩個固定式，分別是樣品通道和參比通道；波長按照設(shè)定模式自動查找或掃描；狹縫多數(shù)仍為2nm固定寬度模式，也有1.5nm狹縫寬度的；檢測器多數(shù)是硅光二極管，但也有少數(shù)用光電倍增管的；光學(xué)性能相對較高，其中光柵的技術(shù)指標(biāo)尤為重要，較佳的光柵為凹面型，為此無論在分辨率還是在雜散光方面指標(biāo)要優(yōu)于簡易型儀器；顯示器為液晶式或連接電腦，數(shù)據(jù)處理可由儀器自身具有的或外接計(jì)算機(jī)處理。并有一定的測量附件。
測量模式：透過率、吸光度、濃度直讀、單光束；單點(diǎn)及掃描均可。
適應(yīng)范圍：此類儀器基本可滿足大多實(shí)驗(yàn)室分析需要。
三、高檔型儀器及特點(diǎn)：
除了中檔儀器的特點(diǎn)外，主要是光學(xué)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)和制造工藝水平更高了，比如使用了大尺寸的凹面光柵，并且光柵刻槽數(shù)大于1800條/mm；波長檢測范圍有的儀器在近紅外區(qū)已經(jīng)超過1100nm，可達(dá)到2600nm；狹縫均為連續(xù)可調(diào)型，以適應(yīng)高分辨率的需要，波長掃描速度的檔位也增加了，檢測器均使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測器；數(shù)據(jù)處理目前基本是電腦來執(zhí)行；衡量一臺儀器的另外一個指標(biāo)是看此儀器是否具有豐富的附屬測量器件，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動進(jìn)樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件等等。
測量模式：透過率、吸光度、濃度直讀、反射方式、能量方式，單點(diǎn)、掃描均可；
適應(yīng)范圍：科研、光學(xué)產(chǎn)品的檢測、生化樣品檢測、復(fù)雜樣品檢測等。不但可以測液態(tài)樣品，也可測固態(tài)樣品。
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