1、出峰不佳，峰分叉
（1）色譜柱被污染。
（2）柱頭填料塌陷。處理對于第一種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定），再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。對于第二種情況，擰開柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分（污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
2、柱壓高原因
（1）緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內(nèi)。
?。?）樣品污染沉積。處理對于第一種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定），再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
3、壓力波動大，流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避免吸入空氣，流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
4、既無壓力指示，又無液體流過
?。?）泵密封墊圈磨損。
?。?）大量氣泡進(jìn)入泵體。處理對于第一種情況，更換密封墊圈；對于第二種情況，在泵作用的同時(shí)，用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
液相色譜儀是一種常見的色譜分析方法，與氣相色譜相比液相色譜可以在常溫中操作，且不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制。
這使得液相色譜非常適合相對分子量較大，難汽化；
不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物和高聚物的分離分析。
然而要選購一臺品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜并不容易。
液相色譜儀的指標(biāo)很多，有關(guān)于泵的、關(guān)于檢測器的、關(guān)于色譜柱的……不過，從選購角度考慮；
可以優(yōu)先考慮噪音、漂移、最小檢測濃度、定性定量重復(fù)性等主要技術(shù)指標(biāo)。
當(dāng)然，這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng)、回路里去看去比較。
1.噪音
噪音指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動產(chǎn)生的聲音。
噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大檢測的靈敏度就越低。
對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果；
2.最小檢測濃度(最小檢測限)
最小檢測濃度是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。
根據(jù)公式CL=2×Nd×C/H(CL：最小檢測濃度Nd：噪音C：樣品濃度最小檢測濃度H：樣品峰高)；
最小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。
如果選購的儀器回避了這個(gè)指標(biāo)，說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音；
3.漂移
漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時(shí)間內(nèi)基線漂離原點(diǎn)的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。
高品質(zhì)的儀器能在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高分析效率；
4.定性定量重復(fù)性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對于分析樣品來說是非常重要的。
好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分不錯的，這就要求多次進(jìn)樣保留時(shí)間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
雖然這些指標(biāo)都屬于檢測器，但是就像前面所說的，條件是要放在整個(gè)回路和系統(tǒng)里去看去比較。
例如：泵的脈動會直接影響噪音指標(biāo)、泵的流量準(zhǔn)確度指標(biāo)，以及密封性不好也會影響相關(guān)指標(biāo)。
所以要系統(tǒng)地看指標(biāo)才可以反應(yīng)出儀器的一些真實(shí)水平。
液相色譜法是分析化學(xué)中發(fā)展比較快、應(yīng)用廣泛的一種分析方法，特別是高效液相色譜儀已經(jīng)成為生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等方面必不可少的重要檢測方法?，F(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展使得分析對象越來越復(fù)雜，分析要求越來越高，液相色譜的強(qiáng)大功能使其成為新世紀(jì)中解決生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等復(fù)雜體系發(fā)現(xiàn)難題的較為有力的技術(shù)和方法。
高效液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論和技術(shù)而發(fā)展起來的。在高效液相色譜中，流動相與組分之間有一定的親和力，分離過程的實(shí)現(xiàn)是組分、流動相和固定相三者間相互作用的結(jié)果，分離不但取決于組分和固定相的性質(zhì)，還與流動相的性質(zhì)密切相關(guān)，一般情況下，高效液相色譜儀的分析可在室溫下進(jìn)行，由于采用顆粒極細(xì)的固定相，柱內(nèi)壓降很大，加上流動相黏度高，因此必須采用高入口壓，以此來維持一定的流動相線速。高效液相色譜儀對于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的物質(zhì)特別有利，它在醫(yī)藥、生化等方面具有非常重要的作用。
色譜柱的常見問題：
1.色譜柱污染：
目前,基層實(shí)驗(yàn)室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染較為有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命就越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,色譜柱柱效就會大幅下降。一般來說,要提取純化好的樣品,可以的方法是用流動相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動相中的溶解性。如果樣品進(jìn)樣后在流動相中沉淀,會堵塞進(jìn)樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)鬼峰。如果出現(xiàn)樣品與流動相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,可更換樣品溶劑,或改進(jìn)樣品純化處理的方法,或?yàn)V過去除不溶性物質(zhì)。
2.色譜柱阻塞與對策
如果配有保護(hù)柱,應(yīng)先去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果色譜柱阻塞,可進(jìn)行反沖洗。如果問題仍然存在,色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在,可能是進(jìn)口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。
3.嚴(yán)格清場
清洗的過程是延長色譜柱壽命的關(guān)鍵,每次分析工作結(jié)束時(shí),要做好清場工作。如果流動相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是離子對,先用50%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,最后過度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強(qiáng)保留組分。如果用甲醇-水為流動相也應(yīng)這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復(fù)柱效。
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