在進(jìn)行液相色譜儀分析實(shí)驗(yàn)時(shí)，流動(dòng)相再進(jìn)入儀器之前，必須使用超聲波清洗機(jī)進(jìn)行簡(jiǎn)單的除氣泡處理，以防對(duì)泵造成損害，對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成干擾。若在檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)液相色譜儀恒流泵里有氣泡，須及時(shí)進(jìn)行排除，排除高壓液相色譜儀泵中氣泡的方法如下。
1、首先，檢查流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶中的溶劑過濾頭是否阻塞。具體做法：將輸入三通器上的溶劑塑料連接管的卸下，將流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶置于高位，利用壓差使溶液流出。如果溶劑流的很順暢，說(shuō)明溶劑過濾頭是好的。如果是一滴一滴的流出，則說(shuō)明過濾頭阻塞，需要超聲清洗，復(fù)原。
2、用堵頭將儀器的高壓液流輸出口封住將色譜柱連在管路上、，可避免在抽液時(shí)將空氣抽入管路內(nèi)。將儀器所配的注射器及塑料連接管插到放空閥的導(dǎo)管上，逆時(shí)針旋開放空閥旋鈕，抽液5-10mL，將泵的流速設(shè)定在每分鐘一毫升的流速。啟動(dòng)泵，觀察塑料連接管的流動(dòng)溶液是否還有氣泡。如沒有氣泡說(shuō)明從過濾頭到放空閥這一段已將氣泡排除。
3、將泵關(guān)閉，將堵頭從儀器的高壓液流輸出口去掉將色譜柱從管路上卸掉、使輸出口放空。順時(shí)針關(guān)閉放空閥旋鈕，將泵的流速設(shè)定在3-5mL的流速，將泵內(nèi)的阻尼器和壓力傳感器的氣泡趕出，流出溶液10-15mL將泵關(guān)閉。連接上色譜柱，將流速設(shè)定在每分鐘一毫升，啟動(dòng)泵，觀察壓力及壓力脈動(dòng)。
4、用水和異丙醇甲醇、交替沖洗泵的內(nèi)腔，使吸附在內(nèi)墻壁上的氣泡趕出。
5、應(yīng)用快速降壓法趕出氣泡：用小堵頭將泵的流動(dòng)相輸出口堵上，將流速設(shè)定在1毫升/分，將柱前壓力升至20Mpa左右，將排空閥快速打開，重復(fù)2~3即可。
系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。
其中輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器是關(guān)鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、與柱或保護(hù)住、柱溫控制器等，現(xiàn)代HPLC儀還有微機(jī)控制系統(tǒng)，進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。
下面就介紹下高效液相色譜使用中的幾個(gè)重要環(huán)節(jié)吧。
實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作
1.過濾流動(dòng)相。為了保證流動(dòng)相潔凈，流動(dòng)相使用前都必須微膜過濾。
2.流動(dòng)相脫氣。為了避免流動(dòng)相中氣泡對(duì)儀器（氣泡可能會(huì)對(duì)儀器及相關(guān)設(shè)備的正常使用及壽命產(chǎn)生一定影響）及分析結(jié)果的影響。
3.運(yùn)行液相泵前盡量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液，也有采用10%異丙醇溶液
（5%甲醇或異丙醇等有機(jī)相溶液能避免微生物污染，但濃度不能太高，高于20%緩沖液可能會(huì)導(dǎo)致鹽結(jié)晶析出，碰到酸堿類物質(zhì)可能會(huì)有比較強(qiáng)烈的反應(yīng)；另外異丙醇粘度較大，清洗能力較強(qiáng)；也有采用純水清洗的，這樣如果儀器每天使用還行，如果長(zhǎng)期不用，為了防止微生物繁殖，純水還得用含有有機(jī)相的清洗液置換出去）
沖洗，這是為了保護(hù)泵柱塞和密封圈等部件在泵運(yùn)行時(shí)不被結(jié)晶鹽等磨損而導(dǎo)致泵頭漏液。
4.每天運(yùn)行儀器前先排氣。一般的液相色譜儀都有排氣功能，沒有的可以不接色譜柱開機(jī)運(yùn)行幾分鐘排氣。
5.泵運(yùn)行時(shí)盡量不采用大流量模式（主要是換流動(dòng)相或排氣泡等，流量盡量設(shè)為3.0ml/min以內(nèi)，這樣更有利于保護(hù)泵柱塞桿和密封圈等部件的壽命）。
6.分析前先對(duì)色譜系統(tǒng)（整個(gè)流路）進(jìn)行沖洗及平衡，尤其是色譜柱。先用純甲醇沖洗30分鐘，再換10%甲醇水溶液沖洗30分鐘，最后換含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)的流動(dòng)相平衡30分鐘。色譜柱如果長(zhǎng)期沒用，每一步?jīng)_洗、平衡量盡量為色譜柱柱容量20倍以上）。
如果流動(dòng)相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，純甲醇沖洗完可直接換為流動(dòng)相。使用色譜柱前知道或懷疑色譜柱中殘留有或酸堿鹽類物質(zhì)，在用純甲醇沖洗前增加一步10%甲醇水溶液沖洗。
7.如果色譜柱需要控溫（升溫），要先運(yùn)行泵后再設(shè)柱溫箱溫度。
8.待儀器運(yùn)行穩(wěn)定后（基線基本走平后，這個(gè)是經(jīng)驗(yàn)值），方可進(jìn)樣。
樣品前處理
1.樣品濃度不要太大，雜質(zhì)不要太多，否則色譜柱處理起來(lái)壓力很大。
2.進(jìn)樣前樣品一定得先經(jīng)微膜（一般采用0.22um或0.45um微膜）過濾。
實(shí)驗(yàn)過程中注意事項(xiàng)
1.為了避免進(jìn)樣器殘留影響，進(jìn)樣前先對(duì)進(jìn)樣器進(jìn)行清洗（這個(gè)不是必須的，但盡量是每進(jìn)一針樣品或標(biāo)準(zhǔn)品前都清洗進(jìn)樣器和進(jìn)樣針，當(dāng)然同一樣品也可以不洗，不同樣品盡量洗），清洗順序?yàn)榧兯?、甲醇、流?dòng)相。
2.每進(jìn)一針樣品后要對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行一次沖洗、平衡后再進(jìn)下一針樣品（等度要求不高，梯度要求相對(duì)高，主要是沖洗色譜柱中殘留的強(qiáng)保留物質(zhì)）。
實(shí)驗(yàn)完畢的后續(xù)工作
1.做完樣要先清洗進(jìn)樣器，清洗順序?yàn)榧兯?、甲醇?/p>
2.關(guān)閉柱溫箱溫度設(shè)置。
3.沖洗色譜系統(tǒng)及色譜柱。先用10%甲醇水溶液沖洗30分鐘后換為純甲醇沖洗30分鐘，待基線基本走平停泵。如果流動(dòng)相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，沖洗時(shí)流動(dòng)相可直接換為純甲醇。色譜柱用完后如果長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不會(huì)再用，純甲醇沖洗量要大于色譜柱柱容量20倍以上的，沖洗后卸下，兩端密封保存。
4.待色譜柱溫度降至接近于室溫時(shí)再停泵、關(guān)機(jī)（這一點(diǎn)需特別注意，目的是防止溫度過高損壞色譜柱）。
5.關(guān)機(jī)前用清洗液清洗柱塞桿。
液相色譜儀的日常操作條件：溫度：10-40℃；相對(duì)濕度<80％；可以是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電干擾、高振動(dòng)設(shè)備，使用后液相色譜儀檢測(cè)器的保養(yǎng)對(duì)液相色譜儀的使用壽命影響至關(guān)重要。
微小的顆粒雜質(zhì)或薄膜沉積在流通池里，會(huì)導(dǎo)致基線噪聲的增加或降低靈敏度。此時(shí)必須進(jìn)行清洗處理。一般常規(guī)清洗不必拆下流通池，可直接在流通池入口處（即檢測(cè)器輸入端），接上一個(gè)專用的注射器接頭，依次用去離子水、酒精和3MHNO3沖洗流通池，最后用去離子水反復(fù)沖洗數(shù)次。檢測(cè)器出口用玻璃瓶盛接流出的廢液。
若檢測(cè)器已長(zhǎng)期使用或受到高濃度樣品的污染，經(jīng)上述方法還不能除去污垢，就得取下流通池，液相色譜儀檢測(cè)器的保養(yǎng)按以下步驟拆開進(jìn)行清洗：
1)卸下紫外檢測(cè)器側(cè)面遮蓋流通池的蓋板，松開固定流通池支架的螺釘，小心地取出流通池支架。
2)拆下連接流通池輸入、輸出端的不銹鋼導(dǎo)管（或PEEK導(dǎo)管），卸下流通池體。仔細(xì)擰下石英窗和透鏡的護(hù)圈。小心取下墊圈、石英窗、透鏡、護(hù)圈，放在一個(gè)盛有乙醇的燒杯內(nèi)，用超聲波清洗機(jī)處理5min~10min。
3)用蒸餾水、乙醇沖洗流通池，并用超聲波清洗，最后用去離子水沖洗數(shù)次，除去池內(nèi)雜物。
4）烘干各部件（注意：避免用手直接接觸透鏡及石英窗）。
5）重新裝配流通池體。
6)按原樣裝在流通池支架上，并接好導(dǎo)管，并進(jìn)行試漏。（方法：池體輸入端與恒流泵連接，開啟恒流泵（流動(dòng)相用蒸餾水），視各密封點(diǎn)及石英窗口是否有漏液溢出。
7）裝入紫外檢測(cè)器機(jī)箱內(nèi)，蓋上蓋板，并用原螺釘、螺帽固定。
注：上述液相色譜儀檢測(cè)器的保養(yǎng)拆洗應(yīng)有經(jīng)培訓(xùn)過的專業(yè)維修人員進(jìn)行。
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