自動進樣器的故障容易被發(fā)現(xiàn)，有時液相色譜儀系統(tǒng)出了故障而不能確定是否是進樣器故障，可以用手動進樣幾次，或用一臺好的自動進樣器代替，如排除了故障，說明自動進樣器有了問題。不同廠商的自動進樣器差異很大，除一些共性故障外，較好查閱操作手冊或與供應商聯(lián)系。
除自動進樣器機械、控制系統(tǒng)可能出現(xiàn)故障外，在操作及方法學方面也可能出現(xiàn)相應的問題，這里主要根據(jù)自動進樣器的設計特點，對試驗過程中可能出現(xiàn)的問題進行說明。
一、滯后體積
高效液相色譜儀中滯后體積是指流動相混合器到柱頭的體積，包括溶劑混合器和混合器到柱頭之間連接管的體積，對于低壓混合系統(tǒng)，也包括泵體積。滯后體積較大可能導致實驗的重復性差、方法移植困難。通常的HPLC系統(tǒng)中，滯后體積一般在0.2mL～5mL之間，主要取決于裝置的設計。
滯后體積中較重要的部分為自動進樣器的定量環(huán)體積。只有定量環(huán)體積小于100μL時，其對滯后體積的影響才可以近似不計。當定量環(huán)體積較大時，這種影響將表現(xiàn)出來。例如，采用50μL的定量環(huán)時滯后體積為300μL，如果改用1mL定量環(huán)，滯后體積將變成1250μL，這種變化直接影響到色譜分離結果。在實際分離過程中，采用的色譜柱較細時，必須考慮滯后體積的影響，解決的辦法為更換較小的定量環(huán)，減小滯后體積。
二、樣品瓶過滿
如果樣品瓶過滿，在瓶蓋較緊、進樣量較大的情況下，可能會導致進樣重復性變差。其原因為樣品瓶中的樣品被抽出時，蓋緊的瓶蓋不能使空氣及時進入，造成部分真空。由于這種真空作用，注射器不能夠吸取足夠量的樣品體積。在極端的情況下，對于揮發(fā)性稀溶液樣品，針內甚至會出現(xiàn)氣泡，影響分析工作的正常進行。
有些自動進樣器采用加排空針的方法克服這一問題，但這種方法并不常用。較簡單的解決辦法為不要使樣品瓶過滿。一般裝樣量在樣品瓶的1／2到3／4之間較為適宜。
三、進針深度的調節(jié)
樣品量足夠多時，不必考慮這一問題。但對于痕量分析而言，進針深度的調節(jié)問題將較為突出。理想的情況下可以使進針深入到接近樣品瓶底部，這樣可以較大限度地利用樣品。當可用的樣品體積有限時，可以采用微量樣品瓶以增加給定體積樣品的相對深度。如果進針過深，可能插入樣品瓶的底部，甚至導致針尖阻塞。如果進針深度不足，樣品只及針尖部分，針將不能抽取足夠量的樣品，部分空氣取而代之。
對于進針深度的調節(jié)，一般采用機械或電動的方法，目前大部分廠商可以在液相色譜儀色譜工作站上設置。無論采用哪種方法，實驗之前都必須認真調節(jié)，更換樣品瓶類型時還需要重新調整。
高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)；
在兩相中做相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
液相色譜儀系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內;
由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程;
各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀。
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
與試樣預處理技術相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能,能夠分離復雜相體中的微量成分。
隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題zui有前途的方法。
由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、環(huán)境分析、無機分析等各種領域。
液相色譜儀與結構儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。
1、液相色譜儀整機保養(yǎng)
?。?）短期停機
在完成一天工作以后，都要停機等第二天再繼續(xù)工作，則可按以下步驟停機。
A）關閉二次儀表（記錄儀、積分儀或色譜工作站）。
B）關閉檢測器電源（同時切斷柱箱溫度檢測器的電源）。
C）停止恒流泵工作，然后切斷其電源。
D）用二次蒸餾水沖洗進樣閥的進樣孔（在“LOAD”和“INJECT”兩個位置）。
E）切斷實驗室工作電源，加滿盛液瓶中的流動相，待第二天使用。
F）將儀器罩上防塵罩。
?。?）長期停機
液相色譜儀數(shù)周或數(shù)月暫不使用，這時除按《短期停機》的A）～D）步驟處理外，還須完成以下步驟：
A）拆下恒流泵的流動相盛液瓶，換上色譜柱指定的保護試劑（例：甲醇、去離子水等），開啟泵數(shù)分鐘（流速0.5mL/min~1.5mL/min）后停泵。
B）從系統(tǒng)中拆下色譜柱，用專用的密封螺帽將柱管兩端密封后保存。
C）用普通φ1.6導管替代分離柱聯(lián)結。
D）用二次蒸餾水或去離子水輸入輸液泵，開啟泵，流量1mL/min~2mL/min，沖洗泵體、進樣閥、檢測器流通池數(shù)分鐘，在沖洗過程切換六通閥數(shù)次，使定量管得到清洗。
E）拆除替代柱的導管、泵輸入端和出口的導管和流通池輸入、輸出口導管，分別用螺帽密封輸液泵出口和流通池輸入、輸出口。
F）撥下總電源接線板的插頭，貯存好專用的流動相和樣品，用干布擦洗儀器，罩上防塵罩。
G）檢測器存放地點應干燥
2、液相色譜儀輸液泵的保養(yǎng)
輸液泵是液相色譜儀的心臟部件，品質再好的泵，若不注意日常保養(yǎng)，其損壞的幾率是極高的，將大大降低儀器的使用價值。
a)使用甲醇作流動相，請注意自身保護和環(huán)境保護，廢液注入空瓶內，集中處理，不得倒入下水道內。
b)輸液泵使用前，先注意探漏檢查，視各密封點和泵體有否漏液。
c)在無流動相通入的情況下，嚴禁啟動泵體電機，以免柱塞密封環(huán)磨損。
d)測試泵流量性能時，用于收集液體的容器，應選用小口瓶頸的容器，防止收集過程中，溶液蒸發(fā)，影響測量精度。，必要時應將其密封存放在干燥容器內，以預防光學系統(tǒng)霉變。
e)金屬泵體的輸液泵，應盡量避免使用含有鹵離子（如KCL、NaCL、NH4CL）的流動相或能產生鹵離子的流動相，若必須使用此類流動相，建議使用泵體用非金屬材料制造的輸液泵。方則使用后，應立即使用去離子水清洗泵體和整個色譜系統(tǒng)的管路。
f)使用的流動相必須是HPLC級或分析純級，特別是配置的流動相，在使用前，必須過濾掉其中的顆粒狀雜質和其他物質（使用0.45μm的濾膜過濾）
g)長期不使用輸液泵，應在最后分析結束時，用注射器吸取去離子水通過專用的泵頭清洗孔清洗泵體和柱塞桿。以延長密封圈和寶石柱塞桿的壽命。
h)輸液泵液路在維修或保養(yǎng)時，應切斷儀器電源。非專業(yè)維修人員請不要打開機箱罩。
449717568