色譜儀該系統(tǒng)為高度集成的HPLC系統(tǒng)。高壓輸液泵、多波長紫外檢測器、進(jìn)樣閥集中在一個(gè)機(jī)箱中,使系統(tǒng)的液路死體積大大減小,同時(shí)整個(gè)LC系統(tǒng)的體積有較大幅度的減小,特別適合空間較為珍貴的實(shí)驗(yàn)室及野外車載移動(dòng)實(shí)驗(yàn)室。下面再接著聊一下色譜過程的條件及計(jì)算機(jī)組合。
當(dāng)滿足以下幾個(gè)條件時(shí),可以認(rèn)為色譜過程的條件是理想的:
(1)組分在液相和氣相之間的分配是瞬時(shí)完成的。
(2)液相和氣相的比率在整個(gè)柱子中是恒定的。
(3)載氣流速維持恒定不變。
(4)組分分子在通過柱子時(shí),不論在氣相或在液相中都不發(fā)生縱向擴(kuò)散。
若組分在固定相中的濃度與在流動(dòng)相中的濃度之比恒定,也即分配系數(shù)值不變,那么,分配等溫線為線性類型。
在線性和理想條件下,所有同種分子將以相同的速度通過柱子,無譜帶擴(kuò)張現(xiàn)象發(fā)生。在實(shí)際氣相色譜過程中,一般是 線性非理想的條件占優(yōu)勢,因而形成了接近高斯分布的對稱的 色譜峰。若遇到非線性的分配等溫線時(shí),則出現(xiàn)非對稱的色峰。
近年來色譜技術(shù)中大量采用電子計(jì)算技術(shù),在色譜分析和研究工作中獲得極為顯薯的成效。色譜一計(jì)算機(jī)組合主要有兩個(gè)方面:
(1)采用計(jì)算機(jī)進(jìn)行大量日常色譜分析中定性定量問題的處理。即先獲得保留數(shù)據(jù)和峰 面積,然后由計(jì)算機(jī)算出相對保留值,根據(jù)計(jì)算機(jī)存貯的保留數(shù)據(jù),得知流出峰為何物,再 由查出的校正因子,計(jì)算出各組分的定量給果。一臺計(jì)算機(jī)可同時(shí)控制幾臺至幾十臺色譜儀, 使色譜分析實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。
(2)采用計(jì)算機(jī)進(jìn)行色譜研究,也取得不少成績。例如,現(xiàn)在己將數(shù)萬篇色譜文獻(xiàn)摘要 錄成磁帶,供色譜工作者借助計(jì)算機(jī)自動(dòng)查閱有關(guān)文獻(xiàn)摘要。同時(shí)已用計(jì)算機(jī)自動(dòng)計(jì)算定性 用的保留指數(shù),并建立了定性鑒定色譜峰的氣相色Y計(jì)算機(jī)系統(tǒng)。此外還采用計(jì)算機(jī)來歸納 不同物質(zhì)和在不同固定液上的大量色譜保留指數(shù)間的經(jīng)驗(yàn)規(guī)律,利用計(jì)算機(jī)計(jì)算多元混合固 定液的較佳配比等等??梢云谕?,不久可由色譜一計(jì)算機(jī)聯(lián)用,解決未知物的定性問題。
以上就是維庫小編為大家整理的色譜過程的條件及相關(guān)內(nèi)容,希望對您有用!
使用的氣相色譜儀特點(diǎn)不同,提高檢測器靈敏度的有效手段不同。那么如何提高產(chǎn)品的靈敏度呢?
1、在不分流進(jìn)樣和直接進(jìn)樣時(shí)使用:
這種方法需要調(diào)節(jié)柱溫箱,與前者不同的地方是溶劑和分析化合物必須同時(shí)在進(jìn)樣時(shí)在較冷的色譜柱上冷卻凝結(jié);
這些凝結(jié)的樣品在色譜柱表面形成“樣品泛濫帶”(floodedzone);
當(dāng)溶劑逐漸揮發(fā)時(shí),樣品泛濫帶的面積就逐漸縮小,“樣品泛濫帶”分析物的濃度就漸漸增加。
等到溶劑完全揮發(fā)后,分析物就在很小的柱表面范圍上凝結(jié)。
2、當(dāng)不分流進(jìn)樣時(shí),液體的樣品揮發(fā)后,在較冷的色譜柱上冷卻凝結(jié):
載氣的體積比液體大很多,所以,當(dāng)樣品冷凝結(jié)時(shí),樣品就濃縮在色譜柱的一個(gè)小范圍內(nèi)。
所以說不論哪種方法,分析物或是溶劑和分析物必須在柱子的小面積上凝結(jié)。
影響樣品在色譜柱上凝結(jié)速度的因素有:
色譜柱的初始柱溫,溶劑的揮發(fā)性,還有就是色譜柱固定相的比例。
色譜柱柱溫的初始溫度:
1.基本是最容易也是比較快做到的方法,一般說來初始溫度愈低的話,分析物凝結(jié)的愈好。
2.建議初始溫度可以設(shè)在比比較快出峰分析物的沸點(diǎn)低攝氏50度左右,溫度保持的時(shí)間可以就是非分流的保持時(shí)間。
第二個(gè)重要的因素:
色譜柱“固定相比例”(phaseratio):
愈低的固定相比例,意味著越厚的膜厚,膜越厚樣品和溶劑越容易溶解在固定相。要改變此因素,也只能試試不同的柱子。這是當(dāng)改變初始溫度不可能達(dá)到的時(shí)候使用的方法。
最后一個(gè)可以改變的因素就是樣品本身:
大部分時(shí)候,樣品本身沒法改變,但是,可以使用不同的溶劑以增加其效果,例如,溶劑的沸點(diǎn)與初始溫度的差別愈大愈好,例如,柱溫初始溫度是攝氏30度時(shí),樣品使用的溶劑是乙酸乙酯(沸點(diǎn)攝氏77.1度)會(huì)比使用二氯甲烷溶劑好(沸點(diǎn)攝氏39度)。
高速逆流色譜法于1982年由美國國立衛(wèi)生院Ito博士研制開發(fā)的一種新型的、連續(xù)高效的液液分配色譜技術(shù),與其它色譜技術(shù)不同的是它不需任何固態(tài)載體,因此能避免固相載體表面與樣品發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致樣品的污染、失活、變性和不可逆吸附等不良影響。
同時(shí)它也具有適用范圍廣、快速、進(jìn)樣量大、費(fèi)用低、回收率高等優(yōu)點(diǎn)。因此,己在生物、醫(yī)藥、食品、材料、化妝品和環(huán)保等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用,尤其是在天然產(chǎn)物活性成分的分離純化領(lǐng)域倍受重視。
高速逆流色譜儀原理及特點(diǎn)
HSCCC利用了一種特殊的流體動(dòng)力學(xué)(單向流體動(dòng)力學(xué)平衡)現(xiàn)象。具體表現(xiàn)為一根100多米長的螺旋空管,注入互不相溶的兩相溶劑中的一相作為固定相,然后作行星運(yùn)動(dòng);同時(shí)不斷注入另一相(流動(dòng)相),由于行星運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的離心力場使得固定相保留在螺旋管內(nèi),流動(dòng)相則不斷穿透固定相;這樣兩相溶劑在螺旋管中實(shí)現(xiàn)高效的接觸、混合、分配和傳遞。由于樣品中各組分在兩相中的分配比不同,因而能使樣品中各組分得到分離。
重現(xiàn)性好。如果樣品不具有較強(qiáng)的表面活性作用,酸堿性也不強(qiáng),那么多次進(jìn)樣,其分離過程穩(wěn)定性都保持很好、峰的保留相對標(biāo)準(zhǔn)偏差也小于2%,重現(xiàn)性相當(dāng)好。
應(yīng)用領(lǐng)域:
(1)天然產(chǎn)物已知有效成分的分離純化
(2)化學(xué)合成物質(zhì)的分離純化
(3)中藥一類、五類新藥的開發(fā)
(4)中藥指紋圖譜和質(zhì)量控制研究
(5)抗生素的分離純化
(6)天然產(chǎn)物未知有效成分的分離純化(新化合物開發(fā))
(7)海洋生物活性成分的分離純化
(8)放射性同位素分離
(9)多肽和蛋白質(zhì)等生物大分子分離以及手性分離等
應(yīng)用范圍廣,適應(yīng)性好。由于溶劑系統(tǒng)的組成與配比可以是無限多的,因而從理論上講HSCCC適用于任何極性范圍的樣品的分離,所以在分離天然化合物方面具有其獨(dú)到之處。并因不需固體載體,而消除了氣液色譜中由于使用載體而帶來的吸附現(xiàn)象,特別適用于分離極性物質(zhì)和其它具有生物活性的物質(zhì)。