色譜柱是由柱管和固定相組成，按照拄管的粗細和固定相的填充方式分為
?。?）填充柱；
?。?）毛細管柱。
色譜柱的平衡
反向色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在甲醇（或乙腈）/水中的。請一定確保您所使用的活動相和甲醇（或乙腈）/水互溶，由于色譜柱在運輸過程中可能會干掉，因此在用活動相分析樣品之前，應使用分10-20倍的體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱。
假如您所使用的活動相中含有緩沖鹽，應留意用含水量很高（約95%）的活動相過渡，樣品分析完后，沖洗柱子是亦然。過往傳統(tǒng)的方法使用純水沖洗，對于非極性柱，如C8或C18，由于純水不能浸潤填料表面而沖倒碳鏈，造成柱效下降。
另外，分析樣品時，由于純水在填料表面不能浸潤形成水膜，出現(xiàn)樣品不保存而分不開，重現(xiàn)性差，所以對于一般的C18或C8，有機溶劑不能低于5%。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。假如該色譜柱需要使用含水或甲醇或乙腈的活動相，請在使用活動相之前用乙醇或異丙醇平衡。
色譜柱在平衡過程中，將流速緩慢地進步用活動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑濃度假如較低，則需要較長的時間平衡）。
1、反相柱
分別用甲醇：水=90：10、純甲醇、二氯甲烷等溶劑著流動相，依次沖洗，每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積。然后再以相反的次序沖洗。
2、正相柱
分別用正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶劑做流動相，順次沖洗，每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高)。注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷。所有的流動相必須嚴格脫水。
3、離子交換柱
長時間在緩沖溶液中使用和進樣，將導致色譜柱離子交換能力下降，。用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
用戶還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復到新柱的水平的。
如果柱子裝反了，可以調(diào)回來，但可能會造成柱內(nèi)擔體塌陷。在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。
1、色譜柱的使用說明：
?。?）色譜柱使用前注意事項：色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用10％左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。
（2）流動相：流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水可以是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDSC18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來所使用的流動相。
?。?）樣品：樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱（SPE）對樣品進行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。
2、色譜柱的保存：
?。?）反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
（2）長期保存色譜柱：如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度可以是室溫。
3、色譜柱的再生：
因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。
?。?）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90（V/V），乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
?。?）正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
4、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法：
色譜柱在使用中常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），以下列舉了部分常見原因及解決辦法：
?。?）色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；
解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
?。?）色譜柱頭的填料被樣品污染；
解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。
?。?）色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結(jié)晶析出；解決方法：如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
（4）流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。解決方法：如果因PH值使用不當，很難恢復
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