分光光度計所采用的分光光度法在定量分析領域中的應用已有數十年的歷史,至今仍是實驗室中常用的分析方法之一。隨著現代科學儀器的不斷發(fā)展,在傳統(tǒng)的追求準確、快速、可靠的同時,小型化、智能化、在線化、網絡化成為了現代可見分光光度計新的增長點。

    結構組成

    分光光度計的基本組成和大多數分光光度計一樣,都是由光源、單色器、比色池、光電檢測器和放大器幾部分組成。

    1.光源

    分光光度計的可見區(qū)的光源仍是采用鹵素鎢燈和氘燈。鹵素鎢燈的工作波長范圍為:320～2500nm,氘燈的工作波長范圍為180～375nm。兩光源有儀器上的一個燈選擇反射鏡自動進行選擇和光源切換。

    1.2單色器(分光系統(tǒng))

    單色器是分光光度計的重要部分,比濾光片選擇波長能更有效地提供帶寬窄的單色光。是采用先進的光柵單色器,由入射狹縫、出口狹縫、色散元件、準直鏡等光學元件組成。入射狹縫是用來調節(jié)入射單色光的純度和強度，也直接影響分辨率。而準直鏡(反射凹面鏡)的作用一是將入射光束變?yōu)槠叫泄馐笤龠M入色散元件，二是把來自色散元件的平行光束聚焦于出口狹縫上,形成光譜像。出口狹縫是單色光的出口，它只讓光譜帶中所需要波長的光從狹縫中透出，而將其他波長的光擋住,不讓其通過。

    色散元件是單色器中的核心元件，起著將復合光分解為單色光的作用。分光光度計的色散元件是凹面反射式全息光柵,它本身就起著分解復合光和準直鏡(聚焦)的作用,而且全息光柵具有雜散光小、不產生偽線和分辨率高的優(yōu)點。

    1.3比色池

    分光光度計配有多種規(guī)格樣品池架和比色杯。池架有標準池架、七位池架、50霯微量池架和多形態(tài)樣品池架。比色杯有常量(2～4mL)、半微量(0.5～1mL)和微量(50～100霯),使用方便。另外還配有樣品架卡套,分為特為酶動力學設計的半導體溫控池:溫度范圍15～50℃,和流動池。

    正確使用分光光度計

    分光光度計操作簡便。

    打開儀器電源開關，儀器應順利通過自檢，然后預熱10分鐘左右，可以進行測定。讀數時應記錄最先顯示的數值，不要讓樣品連續(xù)光照時間太長(動力學測定除外)，特別是在紫外區(qū)域測定時更要快速，因為隨著光的連續(xù)照射讀數會下降，變得不穩(wěn)定。而應用顯色劑顯色后會使讀數穩(wěn)定，給測定帶來方便，同時還會使物質中許多元素的摩爾吸光系數由原來的幾萬提高到數十萬，明顯提高了檢測靈敏度。

    作為一種分子吸收光譜儀,廣泛應用于化學研究、生物醫(yī)藥、環(huán)境科學和食品分析等研究領域。它具有分析精度高、應用范圍廣、分析簡便快速和儀器靈敏度較高的優(yōu)點,是目前大多數實驗室常用的定量分析儀器。