二氧化碳培養(yǎng)箱是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的必要設(shè)備，那么在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)是我們可以借鑒的呢？下面讓我們一起來看一下。
1、啟蒙老師的重要性
一般進(jìn)實(shí)驗(yàn)室都有師兄師姐帶著做，他們就是你做細(xì)胞的啟蒙老師。他們的操作手法、細(xì)節(jié)、理論講解就成了你操作的準(zhǔn)則，如營養(yǎng)液、細(xì)胞瓶的擺放位置；滅菌處理程序；開蓋手法；細(xì)胞吹打手法等等。要學(xué)會他們的正確操作，在第一次的時(shí)候就要重視。
2、像養(yǎng)孩子一樣養(yǎng)細(xì)胞
細(xì)胞真的很脆弱，可以每天都去看看它，以防止出現(xiàn)培養(yǎng)箱缺水、缺二氧化碳、停電、溫度不夠等異?，F(xiàn)象，也好及時(shí)解決這些意外，避免重復(fù)實(shí)驗(yàn)帶來的更大痛苦。
3、好細(xì)胞要及時(shí)保種
細(xì)胞要分批傳代，這樣即使有一批出了問題，還有一批備用的。像后者一般人可能不容易做到。有一次細(xì)胞污染了，全軍覆沒。當(dāng)時(shí)可后悔沒有保種。
4、每種細(xì)胞都有自己的特性
細(xì)胞跟人一樣，不同的細(xì)胞，培養(yǎng)特性是不一樣的。培養(yǎng)過程中要細(xì)細(xì)體會。不同細(xì)胞株使用不同的培養(yǎng)基和血清。
如平滑肌細(xì)胞很活躍，喜歡熱鬧，2~3 天就好多人口，而且不太愛吃喝，真是可以養(yǎng)的孩子了。內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞性格相近，不過它很不講衛(wèi)生，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要經(jīng)常換洗才行。RAW264.7 細(xì)胞也很開朗，而且很能吃，要經(jīng)常喂它，頭疼的是細(xì)胞很容易活化，培養(yǎng)它的瓶子和環(huán)境沒有內(nèi)毒素才好。
5、培養(yǎng)前的工作準(zhǔn)備充分
包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗(yàn)等等。
玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細(xì)胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。
試劑配置。細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。
無菌檢驗(yàn)。主要采用過濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如 PBS、D-Hank's等。
6、試劑分裝保存
包括營養(yǎng)液、胰酶、血清等。
血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細(xì)胞培養(yǎng)）
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 后計(jì)時(shí)，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因?yàn)闀斐沙恋砦镏@著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清（包括不同批次）對細(xì)胞的影響。
7、無菌意識要強(qiáng)
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。
每次操作只處理一株細(xì)胞株，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。
無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置，其它個(gè)人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。
小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
8、選擇正確的培養(yǎng)基
不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻(xiàn)可能對相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時(shí)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，有文獻(xiàn)就選用 neurobase 培養(yǎng)基，而我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴模@種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時(shí)，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。
二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境。
二氧化碳培養(yǎng)箱的三個(gè)工作原理：
一、濕度的控制
因培養(yǎng)物需工作室內(nèi)保持一定的濕度時(shí)，二氧化碳培養(yǎng)箱配有水盤。用戶可在培養(yǎng)時(shí)將水盤放入工作室內(nèi)，水盤加上適量的蒸餾水讓其在工作室內(nèi)自然蒸發(fā)，一般相對濕度可達(dá)95%。
二、溫度的控制
二氧化碳培養(yǎng)箱溫度控制器由鉑電阻作為傳感器與數(shù)字控制電路、LED數(shù)字顯示電路等組成，當(dāng)傳感器輸出與溫度成正比的電阻信號轉(zhuǎn)換成電壓信號經(jīng)電路放大后，一路送至顯示電路顯示實(shí)測溫度。另一路送至比較器與設(shè)定值比較。當(dāng)二者產(chǎn)生偏差時(shí)，觸發(fā)可控硅功率管輸出功率使加熱管產(chǎn)生熱量。當(dāng)偏差減小直至為零時(shí)，其加熱管發(fā)出的熱量亦隨之減小，直至停止加熱?？刂凭€路中有超溫及水位報(bào)警功能。當(dāng)顯示溫度超過設(shè)定值2.0℃時(shí)，溫度控制器發(fā)出聲光報(bào)警信號，同時(shí)切斷輸出，停止加熱，防止溫度繼續(xù)上升；當(dāng)水箱內(nèi)水位過高或過低時(shí)，水位控制器發(fā)出聲光報(bào)警信號，同時(shí)切斷加熱輸出。僅水套式CO2箱具有水位報(bào)警功能！
三、氣路的控制
氣路由高濃度的CO2鋼瓶、氣泵、穩(wěn)壓閥、針型閥，電磁閥、流量計(jì)及儲氣瓶等組成。(高濃度的CO2鋼瓶由用戶自備)。當(dāng)輸入一定壓力的高濃度CO2氣體，通過調(diào)節(jié)閥、針閥及電磁閥的流量、時(shí)間控制，保證一定量的CO2氣體進(jìn)入工作室，達(dá)到自動控制工作室內(nèi)的CO2濃度值。該值同時(shí)通過顯示電路顯示，便于觀察了解。為方便用戶在使用中進(jìn)行濃度的監(jiān)視和采樣，在CO2箱的后背面裝有采樣、監(jiān)視口。因采用了快慢速雙重充氣法，使CO2箱在開、關(guān)門后，工作室內(nèi)的CO2濃度能快速恢復(fù)且無過沖現(xiàn)象。在CO2箱工作過程中，由儲氣瓶對工作室內(nèi)進(jìn)行補(bǔ)氣，以保持穩(wěn)定的CO2濃度值。
CO2培養(yǎng)箱廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、微生物、農(nóng)業(yè)科學(xué)、藥物學(xué)的研究和生產(chǎn)，已經(jīng)成為上述領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)室較為普遍使用的常規(guī)儀器之一；
一是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠?qū)囟?、二氧化碳濃度和濕度提供精確穩(wěn)定的控制，以便于其研究工作的進(jìn)展；
二是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染進(jìn)行有效的防范，并且能夠定期消除污染，以保護(hù)研究成果，防止樣品損失。
所以，選購二氧化碳培養(yǎng)箱關(guān)心的當(dāng)然就是其高可靠性、對污染的防范和控制及使用方便。
二氧化碳培養(yǎng)箱的性能特點(diǎn)：
采用國內(nèi)流線型圓弧型設(shè)計(jì)，外殼采用冷軋鋼板制造，表面靜電噴塑；
本機(jī)溫控系統(tǒng)采用微電腦單片機(jī)技術(shù)，溫控、定時(shí)、超溫報(bào)警；
二氧化碳控制方式為配氣式；
選用進(jìn)口離心風(fēng)機(jī)，具有噪音低，壽命更長。配于合理的風(fēng)道結(jié)構(gòu)，使培養(yǎng)箱加熱升溫快且均勻性好；
顯示方式為雙屏高亮度數(shù)碼管顯示，示值準(zhǔn)確直觀、性能優(yōu)越，觸摸式按鍵設(shè)定調(diào)節(jié)參數(shù)；
溫度控制具有超溫聲光報(bào)警功能，具備兩套控制系統(tǒng)，當(dāng)主控系統(tǒng)失效時(shí)，副控系統(tǒng)起監(jiān)控作用；
采用微電腦自動抑制控制系統(tǒng)，可有效避免培養(yǎng)過程中打開箱門造成內(nèi)腔溫度波動度大；
采用門加熱控制系統(tǒng)，可有效避免內(nèi)玻璃門結(jié)露現(xiàn)象；
采用雙重密封門結(jié)構(gòu)，外門采用磁性門封條結(jié)構(gòu)，內(nèi)室玻璃門與箱體采用硅密封條，密封性好，避免污染又便于觀察；
工作室內(nèi)擱架可隨用戶要求任意調(diào)節(jié)高度及擱架數(shù)量；內(nèi)膽均為鏡面不銹鋼材料制成。半圓式四角設(shè)計(jì)方便清潔。
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