造成液相色譜儀流動(dòng)相供給不暢的原因可能是：流動(dòng)相已經(jīng)接近用完了，管路中吸入氣體引起泵壓力不穩(wěn)定。
應(yīng)經(jīng)常觀察貯液器中流動(dòng)相的量，加足流動(dòng)相保證所有樣品分析完畢。輸液管路上安裝沉子至瓶底，貯液器蓋上留一小孔正好夾住進(jìn)液器，使其不能上下移動(dòng)。
過(guò)濾器阻塞會(huì)引起管道和泵腔真空變化，使壓力不穩(wěn)。當(dāng)過(guò)濾器被微粒所阻塞或長(zhǎng)霉時(shí)，去掉過(guò)濾器后系統(tǒng)會(huì)運(yùn)轉(zhuǎn)正常，換上新的過(guò)濾器即可，有時(shí)候換上新過(guò)濾器任然不暢，那么就需要檢查流動(dòng)相的制備過(guò)程，或者換上大孔徑的過(guò)濾器。不管如何，流動(dòng)相都要重新過(guò)濾。
流速過(guò)高、阻力大，造成真空化現(xiàn)象，這是由于過(guò)濾器孔徑、管道內(nèi)徑、流速和溶劑粘度等引起的。如果流速大于10mL/min，常會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象，試著用下列方法解決。
1、試用低流速，若問(wèn)題解決了則再進(jìn)行下一步；
2、換大孔徑的過(guò)濾器；
3、增加進(jìn)液管內(nèi)徑；
4、抬高或加壓貯液器；
5、改低流速；
6、不用入口過(guò)濾器（但流動(dòng)相一定要先過(guò)濾）。
當(dāng)貯液器蓋子太緊，在貯液器內(nèi)形成真空，打出的流動(dòng)相不連續(xù)。應(yīng)松開(kāi)蓋子或留有1mm縫隙。
進(jìn)液管路阻塞或彎曲折疊會(huì)使泵抽不到液，注意調(diào)整進(jìn)液路道或更新。
液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)?，F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。對(duì)高沸點(diǎn)、難氣化合物的混合物通過(guò)色譜柱核淋洗劑并以實(shí)現(xiàn)分離。應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門(mén)。
液相色譜儀3大系統(tǒng)
系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過(guò)檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
1．進(jìn)樣系統(tǒng)
液相色譜儀一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
2．輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l．47～4．4X10Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速度，這對(duì)提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存器和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、PH值，或改用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。
3、分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長(zhǎng)度為10～50cm(需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管)，內(nèi)徑為2～5mm，由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成)．固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹(shù)脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達(dá)1000?)和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過(guò)機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長(zhǎng)度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。因此，這類(lèi)固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來(lái)。另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?；|(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會(huì)提高分辨率的道理。再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C，通過(guò)改善傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間，就可增加層析柱的效率。
液相色譜儀作為分析實(shí)驗(yàn)室高端必備儀器之一，是實(shí)驗(yàn)室分析員應(yīng)用頻率較高的儀器，縱然是經(jīng)常使用的經(jīng)驗(yàn)豐富的老司機(jī)在使用過(guò)程里不可避免的還是往往疏忽一些問(wèn)題，從而導(dǎo)致一些儀器的故障。方便快速的分析過(guò)程固然重要，但是為了多種樣品而忽略了一些細(xì)節(jié)步驟，總是會(huì)犯些錯(cuò)。在使用液相色譜儀時(shí)四大關(guān)鍵因素，對(duì)正確使用極為重要，下面給大家說(shuō)說(shuō)：
1、液相色譜儀本身：
對(duì)于儀器本身一般不會(huì)有問(wèn)題，特別是剛買(mǎi)回來(lái)的新儀器。對(duì)于儀器本身重要的就是儀器的校驗(yàn)，剛買(mǎi)回來(lái)的儀器一般都是由賣(mài)家先對(duì)儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作（包括IQ、PQ、OQ），確認(rèn)順利通過(guò)后，再請(qǐng)國(guó)家或省級(jí)儀器檢定局的來(lái)校驗(yàn)，檢定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會(huì)對(duì)儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗(yàn)，目的就是為了保證儀器的正常可運(yùn)行狀態(tài)。
2、色譜條件：
色譜條件一般包括流動(dòng)相、色譜柱、檢測(cè)波長(zhǎng)、流速及進(jìn)樣量。
流動(dòng)相就涉及到配制流動(dòng)相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18、2兆歐級(jí)別，試劑試液要求用色譜級(jí)別的，原因?yàn)榉乐顾驮噭┰囈褐械碾s質(zhì)對(duì)色譜結(jié)果的干擾。
色譜柱會(huì)因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個(gè)在色譜柱說(shuō)明書(shū)上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行，否則會(huì)造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測(cè)波長(zhǎng)也會(huì)因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測(cè)器氘燈能量的變化，比如基線(xiàn)波動(dòng)大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時(shí)，但實(shí)際上使用時(shí)間不止，可根據(jù)實(shí)際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1、0ml/min，流速是不可隨意改動(dòng)的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時(shí)為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗(yàn)證，會(huì)對(duì)流速進(jìn)行改變以評(píng)價(jià)方法的適用性。對(duì)于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，如果使用六通閥自動(dòng)進(jìn)樣，一般進(jìn)樣精密度都很好，不需強(qiáng)調(diào)什么。
3、操作人員：
首先，作為液相色譜儀操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)液相的說(shuō)明書(shū)，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護(hù)保養(yǎng)，掌握最基礎(chǔ)故障的排除和維修。
一般液相色譜儀的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作，一般不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題，當(dāng)然這里需要特別指出的是對(duì)于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要，比如流動(dòng)相的過(guò)濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過(guò)濾頭的清洗等，倘若不堅(jiān)持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過(guò)強(qiáng)、色譜峰異常等不必要的故障，浪費(fèi)時(shí)間。
其次，操作人員在配制液相色譜儀分析用待測(cè)樣品溶液時(shí)，由同一個(gè)人單獨(dú)完成，以免不必要的偶然誤差從而造成分析的失敗或誤差。
4、液相安裝環(huán)境：
液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾的屋內(nèi)的臺(tái)面上，有條件的話(huà)盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開(kāi)，一個(gè)是防止色譜基線(xiàn)噪音偏大，基線(xiàn)不穩(wěn)等，一個(gè)是為減少對(duì)人體的危害。
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