色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。
一、物理因素：
(1)硅膠純度：硅膠純度和殘留金屬離子濃度，硅膠的雜質(zhì)會影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，易發(fā)生拖尾。
(2)色譜柱尺寸填料床的長度和內(nèi)徑，增加色譜柱長度，可以在一定程度上提高柱效，但也會升高壓力和導(dǎo)致峰展寬；寬柱徑，提高載樣量，但也會增加橫向擴散，同樣會導(dǎo)致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑，可減少橫向擴散，但壓力較大，對系統(tǒng)要求較高。
(3)顆粒形狀及粒徑球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻，不規(guī)則形柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動相線速度不均勻，容易譜帶展寬；平均顆粒直徑，粒徑越小，柱效越高，柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低，壓力越大。
(4)顆粒表面積：顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和，以m2/g表示，相對而言高表面積對樣品具有較強的保留能力，更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達到平衡狀態(tài)，更適合梯度洗脫程序。
(5)孔徑：顆粒的孔或腔的平均尺寸，范圍是80~300?，大孔徑的填料顆?？梢匝娱L大分子溶質(zhì)在填料表面的滯留時間，改善分離，所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子。
二、化學(xué)因素：
(1)鍵合類型及鍵合相：鍵合相分子與基體單點相連為單體鍵合，這種鍵合方式可以提高傳質(zhì)速率，縮短柱平衡時間；聚合體鍵合為鍵合相分子與基體多點相連，這種鍵合方式可以增加色譜柱穩(wěn)定性，增加載樣量。而鍵合相不同會直接影響化合物的保留行為。
(2)碳覆蓋率：高碳覆蓋率可以提高分辨率和重現(xiàn)性，但分析時間長。
(3)封端：硅膠鍵合相填料中有部分未封端的殘留硅羥基，如圖封端可以減輕待測組分與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng)，改善保留和峰行，這對于堿性化合物尤其重要。而不同的封端技術(shù)也會直接影響色譜柱的效能。
色譜柱是運用于色譜儀系統(tǒng)中起著分離作用的儀器，是色譜儀分析系統(tǒng)的核心部件，色譜柱柱效的高低影響著檢測速率的快慢以及檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，為了提高色譜柱的柱效，保證液相色譜儀分析檢測的靈敏性，了解液相色譜柱的選購技巧尤為重要。
選擇液相色譜柱時需要考慮的主要因素包括：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量，下面來一一介紹：
1、鍵合相：
確定了正反相后基本就簡單了，正相很簡單，我們重點討論下反相，C18主要分離非極性和弱極性物質(zhì)，因為是鍵合硅膠，所以C18也分好幾種有常規(guī)的如C18-A，耐純水的OLAppleC18-AQ、耐酸堿的OLAppleC18-EX等，如果發(fā)現(xiàn)C18保留很弱，調(diào)整流動相也不行，這個時候可以考慮C8甚至C4等。
2、粒徑：
色譜法追求的是高效、高分辨、高速等。目前來說亞2um填料或者2UM核殼填料是很理想的模型，基本具備“三高”特征尤其是高速，線速度不在影響分離度，不過附帶的缺點就是高壓，要升級相應(yīng)的硬件，成本高昂，需要謹慎考慮。5um填料較為普遍，目前來說完全可以勝任各種日常檢測，即使有特殊要求，3um色譜填料基本上也能全覆蓋，不過該模型下線速度和分離度是成反比的。
3、孔徑：
目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。開孔的填料多了個類似分子篩功能，所以選擇孔徑一定要關(guān)注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔徑都很小，可以縮短樣品路徑。所以國際上還有無孔硅膠柱子，也很適合蛋白分離，徹底解決蛋白分子量大和太粘稠堵住孔徑問題。
4、碳載量：
快速柱碳載量很低，如A家等，省時間，省溶劑，但分析部分復(fù)雜樣品如中藥等有點力不從心，這個時候可以考慮英國OLApple色譜柱，碳載量15~23%，碳載量數(shù)值就像河床的水草，越高代表越密集，保留樣品能力越強，越有可能分離開難分離物質(zhì)。
毛細管色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成，其兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板。
毛細管色譜柱正確安裝的步驟如下：
步驟一：檢查氣體過濾器、載氣、進樣墊和襯管等檢查進樣墊和氣體過濾器，保證輔助氣和檢測器用氣通暢有效。如果以前做過沸點較高的化合物，需要將進樣口襯管清洗或更換。
步驟二：將螺母和卡套裝在柱上，并將色譜柱兩端口小心切平在色譜柱的一端裝上相應(yīng)的螺母和卡套，此時色譜柱端口無前后之分，色譜柱支架的支撐部分應(yīng)總是朝向著柱箱門。安裝好螺母和卡套后，將色譜柱端口切平，并用放大鏡進行檢查，以確認切口和管壁成直角，并且沒有殘留的碎屑，沒有毛邊或不平的切割面。
步驟三：將色譜柱連于進樣口上通常來說，色譜柱的頂端應(yīng)保持在進樣口襯管的中下部，當(dāng)進樣針穿過隔墊完全插入進樣口后，如果針尖與襯管中的色譜柱頂端相差1-2cm，這就是較為理想的狀態(tài)。從色譜柱架上取出需要連接的足夠的長度，并按步驟2切割柱子，連接到進樣口。避免用力彎曲壓擠毛細柱，并小心不要讓標(biāo)記牌等有鋒利邊緣的物品與色譜柱接觸磨擦，以防柱身斷裂或受損。將色譜柱正確地嵌入進樣口后，用手把連接螺母擰上，用手擰緊后用扳手再擰1/4-1/2圈。
步驟四：接通載氣載氣必須為高純氮氣（或氦氣），純度達99.999%，使用極性柱時（如FFAP、PEG-20M等），載氣加脫氧管進一步脫氧，這樣可延長柱子的使用壽命。當(dāng)色譜柱與進樣口連接好后，接通載氣。調(diào)節(jié)柱前壓力以得到合適的載氣流速。將色譜柱的另一端（空端），插入裝有己烷的樣品瓶中，正常情況下，我們可以看見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。如果沒有氣泡，就要重新檢查一下載氣裝置和流量控制器等是否安裝完全或設(shè)置正確，并檢測一下整個氣路有無泄漏。等所有問題解決后，將色譜柱端口從瓶中取出，擦試干凈，保證柱端口無溶劑殘留，再進行下一步安裝。毛細管柱前壓參考設(shè)置（Mpa）柱長m柱內(nèi)徑（mm）0.250.320.53150.050.040.02300.10.080.03500.180.140.05
步驟五：將色譜柱連于檢測器上其安裝和所需注意的事項與以上色譜柱與進樣口聯(lián)接（步驟3）部分所講述的大致相同。安裝時要注意色譜柱末端要高于尾吹點，或按照色譜儀說明書安裝。
步驟六：進行氣體檢漏在色譜柱加熱前，要對GC系統(tǒng)進行檢漏。建議使用1∶1的異丙醇/水的混合溶液進行檢查。步驟7：色譜柱的老化色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對色譜柱進行老化了。將色譜柱程序升溫至使用溫度的30℃以下，恒溫30分鐘。這樣柱子內(nèi)吸附的組份會被吹出，以免影響您的分析。最后，將色譜柱的溫度降低至所需要的溫度，即可進行實際樣品的分析。
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