高效液相色譜儀是實(shí)驗(yàn)中常見的儀器之一，色譜柱的靈敏度是確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的重要原因，那么當(dāng)色譜柱的靈敏度不夠時(shí)，我們?cè)撊绾稳ソ鉀Q呢？應(yīng)該從以下幾個(gè)方面去分析：
1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3、樣品與檢測(cè)器不匹配：根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測(cè)器
4、檢測(cè)器衰減太多：調(diào)整衰減即可。
5、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大：解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
6、檢測(cè)器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。
7、檢測(cè)池中有氣泡：解決辦法為排氣。
8、記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)：調(diào)整電壓范圍即可。
9、流動(dòng)相流量不合適：調(diào)整流速即可。
10、檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。
高效液相色譜儀分析中，選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)考慮流動(dòng)相與填料的作用、純度、與檢測(cè)器的匹配、粘度、對(duì)樣品的溶解度和樣品回收等方面。
1、流動(dòng)相與填料的作用：
流動(dòng)相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)。
低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會(huì)溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。
堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。
酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁和氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。
2、純度：
色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過有關(guān)，特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。
3、與檢測(cè)器的匹配：
當(dāng)使用UVD時(shí)，所用流動(dòng)相在檢測(cè)波長下應(yīng)沒有吸收或吸收很小。
當(dāng)使用RID時(shí)，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相，以提高靈敏度。
4、粘度：
高粘度溶劑會(huì)影響溶質(zhì)的擴(kuò)散和傳質(zhì)，使柱效降低，還會(huì)使柱壓增加，分離時(shí)間延長。盡量選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動(dòng)相。
5、對(duì)樣品的溶解度：如果溶解度欠佳，樣品會(huì)在色譜柱內(nèi)沉淀，不但影響純化分離，而且會(huì)使色譜柱惡化。
6、樣品回收：應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。
高效液相色譜儀分析選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的問題：
1.盡量使用高純度溶劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。不純的溶劑會(huì)引起基線不穩(wěn)，產(chǎn)生偽峰。
2.避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降和損壞色譜柱，如使固定液溶解流失和酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。
3.樣品在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。
4.流動(dòng)相粘度低（粘度適中）。若使用高粘度溶劑，會(huì)增高壓力，不利于分離。常用低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度過低的溶劑也不宜采用，如戊烷等，它們?nèi)菀自谏V柱和檢測(cè)器內(nèi)形成氣泡，影響分離。
5.化學(xué)穩(wěn)定性好。
6.流動(dòng)相應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。
對(duì)于紫外吸收檢測(cè)器，應(yīng)注意選用檢測(cè)器波長比溶劑的紫外截止波長長。所謂溶劑的紫外截止波長是指當(dāng)小于截止波長的輻射通過溶劑時(shí)，溶劑對(duì)此輻射產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收，此時(shí)溶劑被看作是光學(xué)不透明的，會(huì)嚴(yán)重干擾組分的吸收測(cè)量。
對(duì)于示差折光檢測(cè)器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動(dòng)相，以達(dá)到zui高靈敏度。
液相色譜儀，看你分離的樣品的種類，看流動(dòng)相是否和樣品互溶，分離程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多種，看樣品的沸點(diǎn)，溶解性。
高效液相色譜儀是利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。高效液相色譜儀在食品分析、環(huán)境分析、生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和無機(jī)分析等領(lǐng)域得到廣泛使用。一般來說，80%～85%的有機(jī)物原則上可采用高效液相色譜儀分析。
一、在食品分析中：
1、食品營養(yǎng)成分分析：蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機(jī)酸（鄰苯二甲酸、檸檬酸和蘋果酸等）、有機(jī)胺和礦物質(zhì)等分析。
2、食品添加劑分析：甜味劑、防腐劑、著色劑（檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)等）和抗氧化劑等分析。
3、食品污染物分析：霉菌毒素（黃qu霉毒素、黃桿菌毒素和大腸桿菌毒素等）、微量元素和多環(huán)芳烴等分析。
二、在環(huán)境分析中：
多環(huán)芳烴（特別是稠環(huán)芳烴）和農(nóng)藥殘留（氨基甲酸脂類，反相色譜）等分析。
三、在生命科學(xué)中的應(yīng)用：
1、低分子量物質(zhì)：氨基酸、有機(jī)酸、有機(jī)胺、類固醇、卟啉、糖類和維生素等分析。
2、高分子量物質(zhì)：多肽、核糖核酸、酶（胰島素、激素、細(xì)胞色素和干擾素等）和蛋白質(zhì)等分析。
四、在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中：
1、合成藥物：抗生素、抗憂郁藥物和黃胺類藥等分析。
2、天然藥物生物堿：吲哚堿、顛茄堿和強(qiáng)心甙等分析。
五、在無機(jī)分析中：
陽、陰離子等分析。
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