色譜柱在使用中常見的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外),以下列舉部分色譜柱常見問題與解決辦法:
1、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染解決方法:如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘,后再用純水超聲10分鐘,重新裝入色譜柱。
2、色譜柱頭的填料被樣品污染解決方法:如確定色譜柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修復(fù)后,重新安裝上柱頭螺絲。
3、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結(jié)晶析出解決方法:如確定定是鹽結(jié)晶,用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。
手性色譜柱(Chiral HPLC Columns)是由具有光學活性的單體,固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相(Chiral Stationary Phases)。
通過引入手性環(huán)境使對映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異,從而達到光學異構(gòu)體拆分的目的。
要實現(xiàn)手性識別,手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。
這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。
手性分離效果是多種相互作用共同作用的結(jié)果。這些相互作用通過影響包埋復(fù)合物的形成,特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結(jié)果。
由于這種作用力較微弱,因此需要仔細調(diào)節(jié)、優(yōu)化流動相和溫度以達到更好的分離效果。
手性色譜柱的分類及應(yīng)用
迄今為止,尚沒有一種類似十八烷基鍵合硅膠(ODS)柱的普遍適用的手性柱。
不同化學性質(zhì)的異構(gòu)體不得不采用不同類型的手性柱,而市售的手性色譜柱通常價格昂貴,因此如何根據(jù)化合物的分子結(jié)構(gòu)選擇適用的手性色譜柱是非常重要的。
根據(jù)手性固定相和溶劑的相互作用機制,Irving Wainer首次提出了手性色譜柱的分類體系:
第1類:通過氫鍵、π-π作用、偶級-偶級作用形成復(fù)合物。
第2類:既有類型1中的相互作用,又存在包埋復(fù)合物。此類手性色譜柱中典型的是由纖維素及其衍生物制成的手性色譜柱。
第3類:基于溶劑進入手性空穴形成包埋復(fù)合物。
這類手性色譜柱中最典型的是由Armstrong教授開發(fā)的環(huán)糊精型手性柱,另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物,如聚(苯基甲基甲基丙烯酸酯)形成的手性色譜柱也屬于此類。
第4類:基于形成非對映體的金屬絡(luò)合物,是由Davankov開發(fā)的手性分離技術(shù),也稱為手性配位交換色譜(CLEC)。
第5類:蛋白質(zhì)型手性色譜柱。
手性分離是基于疏水相互作用和極性相互作用實現(xiàn)。
目前,離子色譜用的分析柱主要由一定內(nèi)徑的柱管加上不同類型的填料所組成,針對離子色譜流動相比較多的采用酸、堿、鹽的特點,目前,多數(shù)離子色譜柱管材料由PEEK材料所組成,隨著離子色譜對柱效要求的提高,離子色譜所用的填料顆粒也越來越小,同時也對柱管所能夠承受的壓力要求越來越高,新型的離子色譜柱要求能夠承受40MPa的壓力。
此外,對特定的分離方式色譜柱,色譜柱內(nèi)徑可采用9mm規(guī)格,而對于一些用于半制備用途的離子色譜柱,也可采用大內(nèi)經(jīng)規(guī)格。
一般離子色譜柱內(nèi)徑約為4mm或4.6mm,這樣的色譜柱比較適合于常規(guī)1ml/min流量的分析,針對特定的痕量分析和聯(lián)用技術(shù)的需要,新型的離子色譜柱液采用微孔型離子色譜柱,微孔型離子色譜柱內(nèi)徑約為2mm,需要的流量只要常規(guī)離子色譜的1/4,但對于同樣的進樣量,檢測信號可以提高4倍,而所用流動相大大減少,是離子色譜今后一個發(fā)展方向。
離子色譜儀色譜柱的構(gòu)造分析_