色譜分析是以假定給定組分的保留值在分離條件不變時保留值恒定為基礎(chǔ)的。對標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜程序而言，每個峰都對應(yīng)于一個組分，以標(biāo)準(zhǔn)品與樣品中組分的保留時間相對應(yīng)進(jìn)行鑒別。恒定的保留時間對分析設(shè)計排列的樣品很重要。
在液相色譜儀分析中常涉及到組分的保留值。保留值發(fā)生改變可使已建立的方法不能繼續(xù)進(jìn)行下去，或引起分析周期太長，或者峰分不開。應(yīng)該找出引起保留值變化的原因。
除上述條件之外，引起保留變化的原因主要包括下列3種：
1.柱-柱之間；
2.日-日或日內(nèi)：保留時間可能隨時間而變化，如溫度、柱溫、pH值等對柱性能有影響，通常是所有的峰提前或延遲。
3.樣品-樣品間：偶爾也有樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間不同，可能是樣品介質(zhì)的影響。
以下重點討論造成日-日間和日內(nèi)保留時間變化的影響因素，它們主要是：
a.分離條件控制差
除了色譜柱外，保留是溫度、流動相組成和流速的綜合體現(xiàn)，如果有一個條件變化，保留時間也會隨之發(fā)生變化。
b.柱平衡慢
流動相組成或溫度變化時，柱在新條件下再平衡需要一定的時間，在柱達(dá)到完全平衡錢不應(yīng)進(jìn)樣。
c.柱鈍化
長時間進(jìn)樣，柱會退化，強保留組分被柱不可逆的保留，導(dǎo)致所有組分保留減少。鍵合相層從填料微粒上剝落下來，會導(dǎo)致某些組分的保留增加，而另一組分的保留減少。
d.柱過載和樣品介質(zhì)相互作用
過大的樣品量超出柱的線性范圍，使保留減少。也可能是樣品本身過載，從其它方面影響保留。
液相色譜柱，是一種用于液體色譜分析儀器的部件。那么我們該如何的去選擇液相色譜柱呢?
下面我們就一起來看看吧。
在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等，液相色譜柱決定最終分離效果，所以在選擇色譜柱時候有必要考慮清楚自己的需求。
首先液相色譜柱目前來說分為正反相色譜柱，正相有SI等，反相有C18等。正相主要分離極性物質(zhì)，反相主要分離非極性物質(zhì)，氨基柱等主要分離二者之間的。
明確了色譜柱大概功能之后，確認(rèn)下自己樣品信息，基本就有點眉目了，方向?qū)α?，剩下的事情就是?xì)節(jié)了如：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量等
1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2.如果樣品極性太強，或酸性太強;可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長；
對流動相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實驗，另外離子對試劑很難洗下來，基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)
3.若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等)；
他們都會減少堿性化合物的拖尾，一般會選擇中性或偏堿的條件下做，因為這樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強，或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點是方法開發(fā)簡單；
缺點是目前實現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少，價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用；
這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點是不能用來分析其它樣品，對流動相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。
在高效液相色譜儀分析過程中，緩沖液是不可或缺的，因為要用它來調(diào)節(jié)流動相的pH值，緩沖鹽使用不當(dāng)，后果可是吃不了兜著走。比如說，液相色譜儀的色譜柱壓升高、柱效下降、保留時間異常等等不良影響：
1、柱壓升高；
原因：緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動相傳質(zhì)，引起柱壓升高。
2、相同化合物的保留時間發(fā)生變化；
原因：如果沒有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣，色譜柱內(nèi)含有的鹽會使化合物的保留時間發(fā)生變化.
3、柱效下降；
原因：
i、有些緩沖鹽會滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降；
ii、凝結(jié)在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對物質(zhì)的保留能力下降，導(dǎo)致柱效下降。因此液相色譜儀用過緩沖鹽后需要對色譜柱進(jìn)行沖洗，水中緩沖鹽濃度較大時應(yīng)特別引起注意。
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