液相色譜儀檢測器阻塞的現(xiàn)象有:系統(tǒng)壓力增高,松開檢測器進(jìn)口的接頭壓力降至正常水平。檢測器部分有三處易發(fā)生阻塞,即進(jìn)口管路、流通池和出口管路。因組設(shè)造成壓力顯著增高,雖然用一般的凈化方法去掉阻塞可能不奏效,但值得一試。如用注射器回抽池中的溶劑受到很大阻力,說明阻塞相當(dāng)嚴(yán)重。若是檢測儀器廠商標(biāo)明池能耐高壓,可用泵反沖,這樣??扇サ糇枞麎毫Γ⒁鈮毫Σ灰^6MPa~7MPa。標(biāo)準(zhǔn)池一般耐壓在3~5MPa左右,不可用此法。
用以上方法試驗(yàn)不能成功疏通檢測器通道阻塞時(shí),可將流通池從檢測器中拆下來,將進(jìn)口管路卸下,用泵方向沖洗。然后再?zèng)_洗出口管路。如果進(jìn)出口管路都是通暢的,那么就是流通池本身阻塞。
進(jìn)口管路是最易發(fā)生堵塞的地方,用小徑的管路可以擋住進(jìn)入檢測器的微粒。但有下列情形者在進(jìn)口處可發(fā)生堵塞:
1、自己填裝的柱在出口處留下填料微粒;
2、修復(fù)柱時(shí)逆向反沖時(shí)間不夠就接到檢測器上;
3、逆向反沖時(shí)原柱頭密封性能不好,填料漏出。
如果堵塞循環(huán)發(fā)生,應(yīng)在柱和檢測器之間裝一個(gè)沒有死體積的在線過濾器。拆下進(jìn)口管路反接到泵上反沖,可以疏通堵塞。
對(duì)一些頑固性阻塞而又不能從池上拆開的管路,可以從管路進(jìn)口處切掉大約1~2cm長的管子。當(dāng)然這是一種無可奈何的選擇,因?yàn)槊看尾僮骱髸?huì)使得管子變短,還涉及到換刃環(huán)接頭等,還可能會(huì)因?yàn)榍锌诓黄秸?、密封不?yán)等造成滲漏。
若用以上方法都不能疏通疏通進(jìn)口管路,應(yīng)考慮更換新管子或請(qǐng)廠商修理。出口管路阻塞,也可參照上述方法進(jìn)行處理。
高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。
儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù);
在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
液相色譜儀系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi);
由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程;
各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀。
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。
隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題zui有前途的方法。
由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。
液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。
液相色譜儀的日常操作條件:溫度:10-40℃;相對(duì)濕度<80%;可以是恒溫、恒濕,遠(yuǎn)離高電干擾、高振動(dòng)設(shè)備,使用后液相色譜儀檢測器的保養(yǎng)對(duì)液相色譜儀的使用壽命影響至關(guān)重要。
微小的顆粒雜質(zhì)或薄膜沉積在流通池里,會(huì)導(dǎo)致基線噪聲的增加或降低靈敏度。此時(shí)必須進(jìn)行清洗處理。一般常規(guī)清洗不必拆下流通池,可直接在流通池入口處(即檢測器輸入端),接上一個(gè)專用的注射器接頭,依次用去離子水、酒精和3MHNO3沖洗流通池,最后用去離子水反復(fù)沖洗數(shù)次。檢測器出口用玻璃瓶盛接流出的廢液。
若檢測器已長期使用或受到高濃度樣品的污染,經(jīng)上述方法還不能除去污垢,就得取下流通池,液相色譜儀檢測器的保養(yǎng)按以下步驟拆開進(jìn)行清洗:
1)卸下紫外檢測器側(cè)面遮蓋流通池的蓋板,松開固定流通池支架的螺釘,小心地取出流通池支架。
2)拆下連接流通池輸入、輸出端的不銹鋼導(dǎo)管(或PEEK導(dǎo)管),卸下流通池體。仔細(xì)擰下石英窗和透鏡的護(hù)圈。小心取下墊圈、石英窗、透鏡、護(hù)圈,放在一個(gè)盛有乙醇的燒杯內(nèi),用超聲波清洗機(jī)處理5min~10min。
3)用蒸餾水、乙醇沖洗流通池,并用超聲波清洗,最后用去離子水沖洗數(shù)次,除去池內(nèi)雜物。
4)烘干各部件(注意:避免用手直接接觸透鏡及石英窗)。
5)重新裝配流通池體。
6)按原樣裝在流通池支架上,并接好導(dǎo)管,并進(jìn)行試漏。(方法:池體輸入端與恒流泵連接,開啟恒流泵(流動(dòng)相用蒸餾水),視各密封點(diǎn)及石英窗口是否有漏液溢出。
7)裝入紫外檢測器機(jī)箱內(nèi),蓋上蓋板,并用原螺釘、螺帽固定。
注:上述液相色譜儀檢測器的保養(yǎng)拆洗應(yīng)有經(jīng)培訓(xùn)過的專業(yè)維修人員進(jìn)行。