紫外分光光度計，就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。
問題1：在使用過程中，出現(xiàn)數(shù)字顯示不能歸零，同時伴有圖線記錄基線位置偏高
可能原因：
?、俟怆姳对龅壤匣?，性能降低；
?、谛盘柼幚戆蹇赡馨l(fā)生故障；
③前置放大版出現(xiàn)故障，引起反饋量增大。
解決辦法：
?、匍_機通電，先做記錄故障曲線，再與原始記錄的標準曲線對照，找出異同點，并作一下定性定能分析。然后用一只同型號規(guī)格的新光電倍增管替換機上的光電管，再開機實驗，結(jié)果記錄出來的圖線并沒有什么變化，由此證明光電倍增管沒有老化變質(zhì)。
?、谶M一步檢查信號處理板，未發(fā)現(xiàn)信號處理板各元器件損壞，對影響靈敏度有關(guān)的電位器檢測，結(jié)果測得數(shù)據(jù)正常，這說明信號處理板沒有故障。
?、塾捎趯σ陨戏治觯收习l(fā)生在前置級放大板可能性很大。應(yīng)采用模擬測試對前置放大板進行測量，先利用直流穩(wěn)壓電源，把各供電電源加上，使其電路單獨工作，用信號發(fā)生器發(fā)出的信號加到輸入端。再用示波器接在輸出端測量輸出信號，將輸入信號與輸出信號對比，結(jié)果波形相同，說明電路沒有故障。用相同方法對一個帶驅(qū)動器的開關(guān)管測量，輸入端加入信號后，用示波器未能測出輸出端信號，判斷開關(guān)管壞，換上同一型號規(guī)格的開關(guān)管，恢復(fù)正常。
問題2：儀器掃描樣品時，顯示一條直線
可能原因：軟件出現(xiàn)故障。
解決辦法：退出操作系統(tǒng)，重新啟動計算機，再次掃描。
問題3：紫外/可見分光光度計接通電源后，光源不亮
可能原因：
?、俟庠礋襞菀褤p壞；
?、诒ｋU管燒壞。
解決辦法：更換氘燈或鎢燈；更換保險管。
問題4：儀器噪音比較大
可能原因：光源燈泡使用時間超過壽命期。
解決辦法：更換光源燈泡。
問題5：基線的某一段噪音特別高
可能原因：波長段相應(yīng)的濾光片受潮發(fā)霉，嚴重損失光的能量。
排除方法：更換相應(yīng)的濾光片。
問題6：儀器自檢時提示通訊錯誤
可能原因：儀器與電腦之間的數(shù)據(jù)線沒有連接好。
解決辦法：連接好數(shù)據(jù)線，重新打開儀器和軟件，重新自檢。
問題7：自檢時提示波長自檢出錯
可能原因：自檢過程中可能打開過儀器樣品室的蓋子。
解決辦法：關(guān)上儀器樣品室蓋子，重新自檢。
問題8：測試過程中提示能量太低
可能原因：
①光源燈泡使用時間超過壽命期；
?、跇映刂杏胁煌腹獾臇|西擋住了光。
解決辦法：更換光源燈泡；拿走擋光的物品
紫外分光光度計是實驗室普及率很高的一種光譜儀器，由于靈敏度高、選擇性好、準確度高、適用濃度范圍廣，而且分析成本低、操作簡便、快速得到廣泛的應(yīng)用，長期在分析領(lǐng)域扮演很重要的角色。
在選擇這類儀器時要考慮哪些因素呢？
1、光學(xué)構(gòu)造（OPTICALCONFIGURATION）
一般來說，紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義，單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是通過一個斬光輪（mirroredchopperwheel）將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實際樣品。
可以最小化光漂移（lampdrift）和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。
因為增加了測量的速度，所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。
2、光源和檢測方法（LIGHTSOURCESANDDETECTION）
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長情況。
例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波長下測量樣品。果果需要更大的靈活性，研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器，可以程序性地進行ELISAs分析和比色分析。
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。
VarianofPaloAlto公司的CaryDeepUV和HitachiHighTechnologiesofTokyo的U-7000AutomatedVacuumUVSystem就是這樣的儀器。
一些儀器具有多種光源供選擇：
紫外光、可見光和甚至紅外光（780nm至3,000nm）。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分（大約380nm到800nm）。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計的帶寬（bandwidth）很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度?？梢酝渡涑鰧嶒灳_要求的光譜。
一種嚴格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進行高分辨率的吸光測量?？勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
為了測量吸光值，分光光度計制造商通常使用光電倍增管（photo-multipliertubes，PMTs）和光敏二極管。
PMTs提供快速的反應(yīng)時間和良好的靈敏度，并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
3、樣品類型（SAMPLEFORMAT）
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實驗室需求。
但盡管對于小實驗室來說，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實驗時間。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。
4、數(shù)據(jù)管理（DATAMANAGEMENT）
大部分單機型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。
另外一個值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的最終使用。各獨立實驗室都有各自感興趣的實驗結(jié)果。
例如一些藥物機構(gòu)需要考慮美國FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評價機構(gòu)的要求選擇不同的數(shù)據(jù)處理方式。
紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。
紫外分光光度計用途
1、檢定物質(zhì)
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長λ-max和摩爾吸收系數(shù)ε是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應(yīng)用。在國內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。
2、與標準物及標準圖譜對照
將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標樣，也可以和現(xiàn)成的標 準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。
3、比較最大吸收波長吸收系數(shù)的一致性
4、純度檢驗
5、推測化合物的分子結(jié)構(gòu)
6、氫鍵強度的測定
實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
7、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定：
8、反應(yīng)動力學(xué)研究
9、在有機分析中的應(yīng)用
有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測定的科學(xué)，它是在有機化學(xué)和分析化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的綜合性學(xué)科。
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