液相色譜儀常見的故障一是堵，二是漏。下面我們來談一下“堵”的情況。（注：流動相以甲醇為例，色譜柱以C18為例）
“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，主要原因就是流動相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來源就是細菌。
“堵”的原因之一：配制流動相時細菌污染
首先，我們要認識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。
新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：
（1）較為理想的方式當然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。唯一的缺點就是價格不菲。
?。?）成箱購買市售品牌純凈水，如，500mL一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗，待菌落數(shù)合格方可使用。這樣每次只要單獨開一支即可，也很方便。每次成本2元左右。
※這里特別指出一個細節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟。但是從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質(zhì)量，這一步完全可以也應(yīng)當去除。
原因有以下三點：
?。?）流動相過濾在理論上有好處，但是，實際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對于配比復(fù)雜的流動相影響更大。
（2）流動相過濾在經(jīng)濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認是比較容易損壞的設(shè)備。主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本。
?。?）流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。
?。?）在實際工作未發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6年時間沒有做過流動相過濾的工作，但是和國內(nèi)同行相比較，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。
“堵”的原因之二：使用流動相時的細菌污染。
指的是：
流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產(chǎn)生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習(xí)慣造成的。
舉簡單的例子：
50％的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。
從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例準確，能得到保留時間重復(fù)性極好的實驗效果。
但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，細菌長得更迅速），一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。
所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復(fù)性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實際實驗效果來說，我建議用10％的甲醇水代替純水溶液（以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數(shù)實驗，在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以完全殺菌了），這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。
“堵”的原因之三：不適當操作。
常見問題的有以下幾種：
?。?）在更換零件時選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。
（2）樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
（3）在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉(zhuǎn)動的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。
（4）在使用金屬管路作出廢液管時，應(yīng)當注意可以廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發(fā)生過。
“堵”的原因講了不少，現(xiàn)介紹查堵的方法。
在發(fā)生“堵”的現(xiàn)象后，就需要找出原因，主要是什么位置發(fā)生了“堵”。注意，絕大多數(shù)情況下，整個系統(tǒng)只會有一個地方發(fā)生堵塞。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細觀察壓力數(shù)值，如果某一個部件（柱子除外）裝上和拆下時的壓力差別很大，可發(fā)展變化判斷。至于柱的堵塞，可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷。
高效液固色譜儀是利用樣品各組分在固定相和流動相中吸附－解吸作用的差異，使各組分在作相對運動的兩相中反復(fù)多次受到吸附－解吸作用而達到相互分離。
主要類型：
液固吸附色譜
1.1分離原理液固色譜是基于各組分吸附能力的差異進行混合物分離的，其固定相是固體吸附劑。
1.2固定相；吸附色譜固定相可以分為極性和非極性兩大類。
1.3流動相；流動相要求：
1.3.1選用的溶劑應(yīng)當與固定相互不相溶，并能保持色譜柱的穩(wěn)定性
1.3.2選用的溶劑應(yīng)有高純度，以防所含微量雜質(zhì)在柱中積累，引起柱性能的改變。
1.3.3選用的溶劑性能應(yīng)與所使用的檢測器相匹配，如果使用紫外吸收檢測器，就不能選用在檢測波長下有紫外吸收的溶劑；若使用示差折光檢測器，就不能用梯度洗脫。
1.3.4選用的溶劑應(yīng)對樣品有足夠的溶解能力，以提高測定的靈敏度。
1.3.5選用的溶劑應(yīng)具有低的黏度和適當?shù)偷姆悬c。
1.3.6應(yīng)盡量避免使用具有顯著毒性的溶劑，以保證工作人員的安全
1.4應(yīng)用：液固色譜是以表面吸附性能力為依據(jù)的，所以它常用于分離極性不同低的化合物，也能分離那些具有相同極性基團，但數(shù)量不同的樣品。
液液分配色譜
1.1分離原理；分配色譜法的原理與液液萃取相同，都是分配定律。
1.2固定相；分配色譜固定相由兩部分組成，一部分是惰性載體，另一部分是涂漬在惰性載體上的固定液。
1.3流動相；分內(nèi)色譜中，要求流動相盡可能不與固定液互溶
1.4應(yīng)用；既能分離極性化合物，又能分離非極性化合物。由于不同極性鍵合固定相的出現(xiàn)，分離的選擇性可得到很好的控制。
鍵合相色譜
1.1分離原理
1.1.1正鍵合相色譜分離遠離：使用的是極性鍵和固定性，溶質(zhì)在此類固定相上的分離機理屬于分配色譜。
1.1.2反鍵合相色譜分離原理：使用的是極性較小的鍵合固定相，其分離機理可用疏溶劑作用理論來解釋。
1.2固定相；按極性大小可分為非極性、弱極性、極性化學(xué)鍵合固定相三種。
1.3流動相
1.3.1正鍵合相色譜中，采用和反相液液分配色譜相似的流動相，流動相的主體成分為己烷或庚烷。
1.3.2反相鍵合相色譜中，流動相采用和反相液液分配色譜相似的流動相，主題為水。
1.4應(yīng)用
1.4.1正鍵合相色譜法的應(yīng)用：多用于分離各類極性化合物如染料、炸藥、多巴胺、氨基酸等；
1.4.2反鍵合相色譜法的應(yīng)用：由于操作簡單，穩(wěn)定性和重復(fù)性好，該方法已成為一種通用型液相色譜分析方法。在生物化學(xué)、醫(yī)藥研究、食品分析和環(huán)境污染分析等多個領(lǐng)域有了很大的應(yīng)用和發(fā)展。
凝膠色譜
凝膠色譜又稱分子排阻色譜，它是按照分子尺寸大小順序進行分離的一種色譜方法。凝膠色譜法的固定相凝膠是一種多孔性的聚合材料，有一定的形狀和穩(wěn)定性。根據(jù)所用流動相的不同，凝膠色譜法可以分為兩類：即用水溶劑做流動相的凝膠過濾色譜法（GFC）與用有機溶劑如四氫呋喃做流動相的凝膠滲透色譜法（GPC）。
當樣品定量管經(jīng)過充分的沖洗后，可以將旋柄轉(zhuǎn)回取樣位置(Load)，也可以繼續(xù)保持在進樣位置，到下次取樣前才切換回取樣位置。在切換回取樣位置時，將樣品進樣針或微量樣品進樣針從進樣閥中拔出。
為防止交叉污染，正常情況下不必每次進樣后都沖洗進樣閥注射針導(dǎo)入口。進樣閥內(nèi)根據(jù)專利設(shè)計的直接連接進樣孔，可以使注射針頭的前端直接連接到樣品定量管的末端，沒有其他空間供樣品殘留。這樣在下一次進樣時，就不會有上一次殘留的樣品進入樣品定量管。
但是在進樣針頭插入或拔出過程中，會有痕量的樣品沉積在針頭密封區(qū)域。精密的測定顯示這種殘留有1nL ~ 10nL。這表明進20μL樣品，會殘留0.005% ~ 0.05%。每次進樣后沖洗注射針導(dǎo)入口可以將此殘留沖洗干凈。沖洗注射針導(dǎo)入口的過程為：設(shè)定流動相的流速為0.1mL/min ~ 1mL/min，將注射針導(dǎo)入口沖洗頭(Rheodyne部件號7125-054)連接到一只體積相對較大的注射器上，用大量的流動相只在進樣位置清洗注射針導(dǎo)入口。這樣進入進樣閥中的液體繞過樣品定量管由樣品溢出管5# 口排出。這一過程可以將注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈徹底清洗。而采用注射器完全插入式的沖洗方式，則不能全部清洗上述部分的表面。在取樣位置將注射針插入注射針導(dǎo)入口時，針頭推動注射針密封圈內(nèi)少量樣品液體(上一次沖洗注射針導(dǎo)入管留下的)進入樣品定量管。當該樣品液體與所用的流動相組成不同，且同時采用部分充滿定量管進樣方式時，在高靈敏度的檢測器上可能出現(xiàn)怪峰。所以沖洗注射針時可以用流動相沖洗。
449717568
