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有關液相色譜儀的系統組成介紹及選購指南

時間:2020-04-22    來源:儀多多儀器網    作者:儀多多商城     

有關液相色譜儀的系統組成介紹

    液相色譜儀系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。


    儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相;


    被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數;


    在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別;


    被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀;


    數據以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統;


    下面將分別敘述其各自的組成與特點。


    進樣系統


    一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量是恒定的。


    這對提高分析樣品的重復性是有益的。


    輸液系統


    該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。


    高壓泵的一般壓強為47~44X10Pa,流速可調且穩(wěn)定,當高壓流動相通過層析柱時;


    可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動速度;


    這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。


    流動相貯存器和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變;


    包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。


    這就可使各種物質(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。


    分離系統


    該系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。


    色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時,可在二者之間加一連接管);


    內徑為2~5mm,由"優(yōu)質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成;


    住內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質和固定液構成)。


    固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成;


    它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點;


    加之其表面經過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣);


    或者用化學法偶聯各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。


    因此,這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。


    例如,在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。


    另外,固定相基質粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴散效應。


    基質粒度小,微孔淺,樣品在微孔區(qū)內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。


    根據柱效理論分析,基質粒度小,塔板理論數N就越大。


    這也進一步證明基質粒度小,會提高分辨率的道理。


    再者,高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調到60C;


    通過改善傳質速度,縮短分析時間,就可增加層析柱的效率。

標簽: 液相色譜儀
液相色譜儀 有關液相色譜儀的系統組成介紹_液相色譜儀

關于液相色譜儀的選擇

    液相色譜儀是一種常見的色譜分析方法,與氣相色譜相比液相色譜可以在常溫中操作,且不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制。這使得液相色譜非常適合相對分子量較大,難汽化,不易揮發(fā)或對熱敏感的物質、離子型化合物和高聚物的分離分析。

 

液相.jpg


    然而要選購一臺品質優(yōu)良的液相色譜并不容易。液相色譜儀的指標很多,有關于泵的、關于檢測器的、關于色譜柱的……不過,從選購角度考慮,可以優(yōu)先考慮噪音、漂移、最小檢測濃度、定性定量重復性等主要技術指標。當然,這些指標都要放在系統、回路里去看去比較。


    1.噪音


    噪音指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質作用產生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動產生的聲音。噪音的大小直接關系到儀器的檢測靈敏度,噪音越大檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好,否則噪音過大將會導致基線不穩(wěn),甚至影響分析結果;


    2.最小檢測濃度(最小檢測限)


    最小檢測濃度是反映儀器靈敏度的重要參數。根據公式CL=2×Nd×C/H(CL:最小檢測濃度 Nd:噪音 C:樣品濃度最小檢測濃度 H:樣品峰高),最小檢測濃度是和噪音成正比的,噪音越大,最小檢測濃度就越大,靈敏度就越低。如果選購的儀器回避了這個指標,說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎上去比較噪音;


    3.漂移


    漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時間內基線漂離原點的距離,通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質的儀器能在較短的時間內達到穩(wěn)定,從而在一定程度上提高分析效率;


    4.定性定量重復性


    主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標,這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應該是十分不錯的,這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性,這樣做出來的結果才能使人信服。雖然這些指標都屬于檢測器,但是就像前面所說的,條件是要放在整個回路和系統里去看去比較。


    例如:泵的脈動會直接影響噪音指標、泵的流量準確度指標,以及密封性不好也會影響相關指標。所以要系統地看指標才可以反應出儀器的一些真實水平。


    在選擇儀器的時候需要充分考慮到儀器的方方面面才能拿到自己滿意的機器。


    首先從常規(guī)的幾個部件做個簡單的分析。


    (一)輸液泵應具備如下性能:


    ① RSD(流量穩(wěn)定性)<0.3%;


    ② 流量范圍寬, 0.1~5.0ml/min內連續(xù)可調,有的實驗則需要更大流量;


    ③ 輸出壓一般應能達到150~400 kg/cm2,流量越大,最高壓力越低;


    ④ 液缸容積小,有助于減少流動相死體積,利于清洗。


    ⑤ 密封性能好,耐腐蝕。


    (二)檢測器


    ①紫外檢測器,分為可變單波長檢測器VWD和二極管陣列檢測器DAD,可以檢測有紫外吸收的物質


    ②熒光檢測器,檢測有熒光的物質


    ③視差折光檢測器,通用型檢測器,但對環(huán)境要求極為苛刻,而且靈敏度低


    ④ELSD,蒸發(fā)光散射檢測器


    ⑤MSD,質譜檢測器


    常用的是紫外檢測,然后是MSD和ELSD


    (三)色譜柱


    要求柱效高、選擇性好,分析速度快等。目前市場上銷售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、氧化鋁、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。


    一般的分析只需5000塔板數的柱效;同系物分析500即可;難分離物則可用2萬的柱子。


    因此一般10~30cm左右的柱長基本能滿足復雜混合物分析的需要。所以要根據自己實際情況來選擇合適的柱子。


    柱效受柱內外因素影響,為使色譜柱達到較佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結構(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術。即使可以的裝填技術,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統中,柱外效應對柱效的影響遠遠大于管壁效應。


    此外,溫度在色譜分析中是個不容忽視的環(huán)境條件,環(huán)境溫度對溶劑的溶解能力、色譜柱的性能、流動相的粘度都有影響。而且不同的檢測器對溫度的敏感度不一樣。保持恒定的溫度對實驗而言是個絕對不容忽視的條件,因此也要留意注溫箱的選擇。以保證實驗結果的準確性。


    (四)進樣器


    進樣裝置要求:密封性好,重復性好,死體積小,保證中心進樣,進樣時對色譜系統的壓力、流量影響小。而且進樣方式多種多樣,可分為隔膜進樣、停流進樣、閥進樣、自動進樣。自動進樣器則是市場發(fā)展的趨勢。


    (五)數據處理系統


    一般專業(yè)的液相色譜儀生產廠家都有自己配套的液相色譜儀控制軟件。但有不少液相色譜儀可以使用通用型的色譜數據工作站進行數據計算處理。進口軟件價格比較高,這個自己得根據資金選擇了。


    二元泵和四元泵的區(qū)別二元有兩個泵,泵后混合,氣體的溶解度隨壓力的增大而增大,所以二元高壓混合不會產生氣泡。四元只一個泵(另外一個是輔泵),是泵前混合,在常壓下進行的,兩種液體混合時,會降低氣體在混合溶液中的溶解度,通常會有氣泡產生,所以四元低壓梯度系統一定要配在線真空脫氣機

標簽: 液相色譜儀
液相色譜儀標簽: 關于液相色譜儀的選擇_液相色譜儀組合標題:

安捷倫液相色譜儀日常保養(yǎng)方法

  安捷倫液相色譜儀的日常維護及保養(yǎng)方法如下,一起來看看

  1、手動進樣器:

  平時應該注意使用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進樣分析狀態(tài)清洗;如果出現漏液現象,原因極可能為轉子密封墊磨損或污染,一般要申請維修或更換配件。

  2、排液閥:

  此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損,可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。

  3、單向閥

  如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取,則可能是單向閥出現問題,卸下用異丙醇超聲波清洗,清洗時須按其安裝的方向放置在小燒杯中,切記不可與安裝方向倒置超洗!

  4、工作站:

  出現死機可重起計算機;不正常運行時,首先可更換電腦測試其硬件故障;或在本機上重新插拔接口、重新安裝軟件。

  5、過濾器:

  當色譜峰出現異常情況時,有可能是此部件被污染, 拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。

  6、吸濾頭:

  特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換。

  7、流動相的抽作要求:

  高效液相級色譜醇,二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過濾;

  流動相脫氣至關重要(可采用抽濾,超聲波脫氣等方法)

  8、流通池:

  在色譜峰不正常時會可能是此部件補污染。可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據說明書進行操作或申請維修)。

  9、泵頭:

  泵頭漏液或出現其它故障一般要申請維修(如漏液,或更換柱塞桿及其密封墊等)

  泵壓不穩(wěn):

  1、泵頭有氣泡——流動相脫氣/大流量沖洗泵/用注射器抽取流動動相

  2、單向閥故障——清洗

  若上述操作仍不能解決,可用異丙醇沖洗流動(無色譜柱沖洗,由手動進樣器直接進檢測器),流量為3-4ml/min,沖洗50分鐘左右,然后重新安裝色譜柱,更換流動相平衡,如此再不能解決泵壓波動故障,可申請更換配件。

  10.漏液處理:

  C18柱絕對不能進蛋白樣品、血樣,生物樣品。

  要注意柱子的PH值范圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品。

  長時間不用儀器,應該將柱子取上用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應該用有機相(如甲醇)保存,因為純水易長霉。

  流路堵塞問題:堵塞導致壓力太大,按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查,并清洗。清洗方法:①以民丙醇作溶劑沖洗②放在異丙醇中超聲波清洗③用10%稀硝酸清洗

  11.緩沖鹽的使用:

  流動相含有鹽分時,做完實驗后一定要進行流路沖洗;

  首先用水沖洗,打開排液閥用PURG鍵轉換出原有含鹽的流動相,然后關閉排液閥打開泵沖洗全部流路45分鐘以上,如此更換流動相為水和甲醇混合液沖洗全部流路30分鐘(此步驟一般可省去,根據實驗而論),最后更換純甲醇沖洗全部流路45分鐘以上。

  12.泵頭沖洗;

  用備件中的針頭和針管分別用蒸餾水和純甲醇沖洗3-5ml。

  如流動相不含鹽,可對機器定期進行簡單的沖洗維護,根據實驗多少而定。

  手動進樣器沖洗;

  同樣用備件中的針管和專用沖洗針頭對手動進樣器的裝載狀態(tài)和進樣狀態(tài)分別進行沖洗3-4ml的蒸餾水,然后再沖洗3-4ml的純甲醇。確保每次做完實驗,所有流路中充滿純甲醇!

安捷倫液相色譜儀日常保養(yǎng)方法_

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