超微量分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器 ,無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)都有廣泛而重要的應(yīng)用。
超微量分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器 ,無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)督有廣泛而重要的應(yīng)用。分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。超微量分光光度計(jì)已成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
核酸的定量核酸的定量是超微量分光光度計(jì)使用頻率最高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測(cè)試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測(cè)試空白液和樣品液。然而，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者最頭痛的問(wèn)題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。
事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和精確度。如德國(guó)伯赫Colibri超微量分光光度計(jì)的準(zhǔn)確度≤1.0%(1A)。這樣多次測(cè)試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng)，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為了最大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值可以在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過(guò)低，或者過(guò)高(超過(guò)光度計(jì)的測(cè)試范圍)。最后是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值;混合液不能存在氣泡，空白液無(wú)懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的最小體積等多個(gè)操作事項(xiàng)。
除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評(píng)估樣品的純度，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測(cè)溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
與傳統(tǒng)分光光度計(jì)相比，超微量分光光度計(jì)要求的樣品體積小，不需要比色皿，比色杯清洗方便，只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測(cè)平臺(tái)上擦拭干凈即可。除此之外，實(shí)驗(yàn)過(guò)程也更為簡(jiǎn)單，不需預(yù)熱，可隨時(shí)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示吸光度值的同時(shí)，程序直接給出濃度值。超微量分光光度計(jì)與傳統(tǒng)相比，體積更小，更方便使用。
實(shí)驗(yàn)室如何選擇一款性價(jià)比高、質(zhì)量可靠的超微量分光光度計(jì)，下面幾項(xiàng)指標(biāo)可以作為參考：
1、使用要求和預(yù)算：固定波長(zhǎng)的價(jià)值量較低幾萬(wàn)塊錢，可以做全波長(zhǎng)掃描的價(jià)值量高，一般在6萬(wàn)以上。如果僅要求可以測(cè)核酸、蛋白，可以選擇固定波長(zhǎng)的。
2、檢測(cè)濃度范圍：根據(jù)日常提取樣品的濃度，范圍大的會(huì)檢測(cè)到15000ng/ul，范圍小的會(huì)在3000ng/ul。
3、光源：LED光源或者氙燈光源，
4、品牌：進(jìn)口或者國(guó)產(chǎn)。國(guó)產(chǎn)品牌的價(jià)位一般在3-5萬(wàn)，進(jìn)口品牌的價(jià)位一般在4-10萬(wàn)。對(duì)產(chǎn)品品牌要求高的，預(yù)算比較充足的用戶，可以考慮購(gòu)買進(jìn)口品牌的；國(guó)產(chǎn)品牌的性價(jià)比高，技術(shù)水平也能達(dá)到國(guó)外的先進(jìn)水平。
超微量分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器，常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)督有廣泛而重要的應(yīng)用。
超微量分光光度計(jì)是精密光學(xué)儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對(duì)保持儀器良好的性能和保證測(cè)試的準(zhǔn)確度有重要作用。
超微量分光光度計(jì)的日常維護(hù)和保養(yǎng)：
1.光源的壽命有限，為了延長(zhǎng)光源使用壽命，在不使用儀器時(shí)不要開(kāi)光源燈，應(yīng)盡量減少開(kāi)關(guān)次數(shù)。
2.單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開(kāi)。選擇波長(zhǎng)應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動(dòng)，不可用力過(guò)猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。
3.必須正確使用吸收池，應(yīng)特別注意保護(hù)吸收池的兩個(gè)光學(xué)面。
4.光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間曝光，且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
5.儀器若暫時(shí)不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
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