分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。由于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量樣本量很小,于是超微量分光光度計(jì)應(yīng)運(yùn)而生。超微量分光光度計(jì)近年來(lái)已經(jīng)替換普通的分光光度計(jì)成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的新寵,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)等領(lǐng)域。
超微量分光光度計(jì)與傳統(tǒng)分光光度計(jì)相比,前者具備的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)在于:
(1)所需樣品體積小,僅需0.5—2μl;
(2)不需要比色皿,用移液槍直接將樣品滴加到檢測(cè)平臺(tái)上,測(cè)量時(shí)樣品自動(dòng)形成液柱,檢測(cè)完成后只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測(cè)平臺(tái)上擦拭干凈即可,避免了因?yàn)楸壬笄逑床粌魩?lái)的交叉污染;
(3)一般具有多個(gè)光程(電機(jī)控制自動(dòng)選擇)【BIO-DLMicroDrop基座模式下光程1.0mm、0.2mm、0.1mm和0.05mm自動(dòng)調(diào)整】,而傳統(tǒng)分光光度計(jì)的光程為10mm,超微量分光光度計(jì)樣品無(wú)需稀釋?zhuān)瑴y(cè)量范圍可達(dá)到常規(guī)分光光度計(jì)的50倍【BIO-DLMicroDrop基座模式下dsDNA檢測(cè)范圍:2~15000ng/μl】;
(4)氙氣閃光燈為燈源,代替了氘燈(紫外)和鎢燈(可見(jiàn)),使用壽命更長(zhǎng);
(5)不需要預(yù)熱,可隨時(shí)檢測(cè),檢測(cè)時(shí)間短【BIO-DLMicroDrop<5秒】;
(6)顯示吸光度值的同時(shí),程序直接給出濃度值(核酸、蛋白和熒光染料);
(7)占據(jù)實(shí)驗(yàn)室空間體積比傳統(tǒng)分光光度計(jì)小很多【BIO-DLMicroDrop重量:2.1kg】
與傳統(tǒng)分光光度計(jì)相比,超微量分光光度計(jì)要求的樣品體積小,不需要比色皿,比色杯清洗方便,只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測(cè)平臺(tái)上擦拭干凈即可。除此之外,實(shí)驗(yàn)過(guò)程也更為簡(jiǎn)單,不需預(yù)熱,可隨時(shí)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果顯示吸光度值的同時(shí),程序直接給出濃度值。超微量分光光度計(jì)與傳統(tǒng)相比,體積更小,更方便使用。
實(shí)驗(yàn)室如何選擇一款性?xún)r(jià)比高、質(zhì)量可靠的超微量分光光度計(jì),下面幾項(xiàng)指標(biāo)可以作為參考:
1、使用要求和預(yù)算:固定波長(zhǎng)的價(jià)值量較低幾萬(wàn)塊錢(qián),可以做全波長(zhǎng)掃描的價(jià)值量高,一般在6萬(wàn)以上。如果僅要求可以測(cè)核酸、蛋白,可以選擇固定波長(zhǎng)的。
2、檢測(cè)濃度范圍:根據(jù)日常提取樣品的濃度,范圍大的會(huì)檢測(cè)到15000ng/ul,范圍小的會(huì)在3000ng/ul。
3、光源:LED光源或者氙燈光源,
4、品牌:進(jìn)口或者國(guó)產(chǎn)。國(guó)產(chǎn)品牌的價(jià)位一般在3-5萬(wàn),進(jìn)口品牌的價(jià)位一般在4-10萬(wàn)。對(duì)產(chǎn)品品牌要求高的,預(yù)算比較充足的用戶(hù),可以考慮購(gòu)買(mǎi)進(jìn)口品牌的;國(guó)產(chǎn)品牌的性?xún)r(jià)比高,技術(shù)水平也能達(dá)到國(guó)外的先進(jìn)水平。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計(jì)對(duì)工作環(huán)境的要求如下。
?、賰x器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi),使用溫度為5~35℃.相對(duì)濕度不超過(guò)85%。
?、趦x器應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上,且避免強(qiáng)烈的振動(dòng)或持續(xù)的振動(dòng)。
?、凼覂?nèi)照明不宜太強(qiáng),且應(yīng)避免直射日光的照射。
?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風(fēng),以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
?、荼M量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
⑥供給儀器的電源電壓為AC220V±22V,頻率為50Hz±1Hz,并必須裝有良好的接地線(xiàn)。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器,以加強(qiáng)儀器的抗干擾性能。
?、弑苊庠谟辛蚧瘹涞雀g性氣體的場(chǎng)所使用。
超微量分光光度計(jì)的日常維護(hù)和保養(yǎng)
?、俟庠?。光源的壽命有限,為了延長(zhǎng)光源使用壽命,在不使用儀器時(shí)不要開(kāi)光源燈,應(yīng)盡量減少開(kāi)關(guān)次數(shù)。在短時(shí)問(wèn)的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開(kāi)啟。儀器連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)3h。若需長(zhǎng)時(shí)間使用,可以間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應(yīng)及時(shí)更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附。若不小心接觸過(guò),要用無(wú)水乙醇擦拭。
?、趩紊?。單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開(kāi)。選擇波長(zhǎng)應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動(dòng),不可用力過(guò)猛。為防止色散元件受潮生霉,必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色,應(yīng)立即更換。
?、畚粘?。必須正確使用吸收池,應(yīng)特別注意保護(hù)吸收池的兩個(gè)光學(xué)面。
④檢測(cè)器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間曝光,且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
?、莓?dāng)儀器停止工作時(shí),必須切斷電源。
?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污,在停止工作時(shí),應(yīng)蓋上防塵罩。
?、邇x器若暫時(shí)不用要定期通電,每次不少于20~30min,以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài),并且維持電子元器件的性能。