高效液相色譜儀的衍生化技術(shù)衍是指將用通常檢測方法不能直接檢測或檢測靈敏度比較低的物質(zhì)與某種試劑（即衍生化試劑）反應，使之生成易于檢測的化合物的過程。按衍生化方法可分為柱前衍生化和柱后衍生化。
一、柱前衍生化：
柱前衍生化是指將被測物轉(zhuǎn)變成可檢測的衍生物后，再通過色譜柱分離。這種衍生化可以是在線衍生化，即將被測物和衍生化試劑分別通過兩個輸液泵送到混合器里混合并使之立即反應完成，隨之進入色譜柱；也可以先將被測物和衍生化試劑反應，再將衍生物作為樣品進樣；也可以在流動相中加入衍生化試劑，進樣后，讓被測物與流動相直接發(fā)生衍生化反應。
二、柱后衍生化：
柱后衍生化是指先將被測物分離，再將從色譜柱流出的溶液與衍生化試劑在線混合，生成可檢測的衍生物，然后導入檢測器。按生成衍生物的類型可分為紫外可見光衍生化、熒光衍生化、拉曼衍生化和電化學衍生化等。
1、紫外可光見衍生化：
?。?）紫外衍生化是指將紫外吸收弱或無紫外吸收的有機化合物與帶有紫外吸收基團的衍生化試劑反應，使之生成可以用紫外檢測的化合物。如胺類化合物容易與鹵代烴、羰基、?；愌苌噭┓磻?。
?。?）可見光衍生化有兩個主要的應用：一是用于過渡金屬離子的檢測，將過渡金屬離子與顯色劑反應，生成有色的配合物、螯合物或離子締合物后用可見光檢測；二是用于有機離子的檢測，在流動相中加入被測離子的反離子，使之形成有色的離子對化合物后，分離檢測。
2、熒光衍生化：
熒光衍生化是指將被測物與熒光衍生化試劑反應后生成具有熒光的物質(zhì)進行檢測。有的熒光衍生化試劑本身沒有熒光，而其衍生物卻有很強的熒光。衍生化技術(shù)不僅使高效液相色譜儀分析體系復雜化，而且需要消耗時間，增加分析成本，有的衍生化反應還需要控制嚴格的反應條件。因此，只有在找不到方便而靈敏的檢測方法或為了提高分離檢測的選擇性時，才考慮用衍生化技術(shù)。
1、流動相的抽濾要求
色譜純試劑，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾。
2、吸濾頭
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。
3、單向閥
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取，則可能是單向閥出現(xiàn)問題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時須按其安裝的反相放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！
4、泵頭
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等)。
5、過濾片
當色譜峰出現(xiàn)異常情況時，有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
6、排液閥
此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
7、手動進樣器
平時應注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染，一般須申請維修或更換配件。
8、流通池
在色譜峰不正常時可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進行操作或申請維修)。
9、工作站
出現(xiàn)死機可重啟計算機；不正常運行時，首先可更換電腦測試其硬件故障；或在本機上重新插撥接口、重新安裝軟件。
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫，也可以拓展為制備系統(tǒng)，采用高壓混合器連接兩個高壓恒流泵，利用RS232通訊，即可實現(xiàn)梯度分析；
便于用戶自由選擇與搭配，混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構(gòu)成，用途廣泛；
可廣泛應用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。
高效液相色譜儀分離原理：液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。
流動相與固定相之間應互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。
當試樣進入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進行分配。達到平衡時，高效液相色譜儀報價，服從于高效液相色譜計算公式；
6種定量計算方法：歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標法、外標法，高效液相色譜儀適用范圍，以及指數(shù)計算法。
高效液相色譜儀特點：
1、梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，編輯、存貯60個梯度方法，運行復雜的梯度程序；
2、泵形式：串聯(lián)雙柱塞 浮動式密封圈；泵頭自沖洗功能，泵無須手動排空即可輸液“自吸式單向閥”技術(shù)，可延長密封圈使用壽命；
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結(jié)構(gòu)和獨特的散熱技術(shù)，高效的光學系統(tǒng)和數(shù)字過濾；
4、程序化的溶劑類和壓縮因子，可自動補償；完整的預清洗功能，更于快速溶劑更換；
5、波長調(diào)節(jié)功能：既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設(shè)定，全封閉集成型光電檢測元件，無需任何機械部分調(diào)整即可選擇或改變波長；
6、光源運行時間在線監(jiān)測并顯示，方便用戶確定光源壽命；
7、三條流量校正曲線以及特有的多點參數(shù)校正，保障了極高的流量準確性；
8、梯度：高壓2-3元；梯度方式：高壓，梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，可通過PC機及泵控制；
9、實時顯示樣品池和參比池能量，方便判斷光源和流通池狀態(tài)；
10、紫外檢測器具有自動波長定位調(diào)整，自動調(diào)零，多量程輸出選擇；
11、智能化高，可實現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)化平臺監(jiān)控，提高了你的QC效益；
12、自動化，讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時間。
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