熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。
熒光分光光度計(jì)的基本原理:
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。 物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子 吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光。
不同物質(zhì)由于分子 結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
熒光分光光度計(jì)的優(yōu)缺點(diǎn):
優(yōu)點(diǎn):靈敏度高,可以用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜,不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
缺點(diǎn):
1、熒光的光強(qiáng)并不高,所以呈線性情況有時(shí)不很理想;
2、某些反應(yīng)熒光持續(xù)的時(shí)間較短;
3、熒光的發(fā)散方向不集中,不像透射光那樣集中,強(qiáng)度高;
4、受某些離子的干擾影響,熒光會(huì)湮滅,試驗(yàn)速度必須要快。
熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等很多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長掃描范200~800nm。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn),可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。
熒光分光光度計(jì)使用說明:
開機(jī)時(shí),請先開氙燈電源,再開主機(jī)電源。每次開機(jī)后請先確認(rèn)一下一起兩邊排熱風(fēng)扇工作正常,以確保儀器正常工作,發(fā)現(xiàn)風(fēng)扇有故障,應(yīng)停機(jī)檢查。
主機(jī)工作時(shí)頂部排熱器溫度很高,切勿觸摸,以免受傷.氙燈點(diǎn)亮后需一定時(shí)間穩(wěn)定,故進(jìn)行精密測試應(yīng)在30分鐘以上。當(dāng)氙燈未能觸發(fā),并連續(xù)發(fā)生“吱吱”高頻聲或“叭叭”打火聲時(shí),請立即關(guān)掉氙燈電源,稍后數(shù)秒重新觸發(fā)。請盡量減少不必要的氙燈觸發(fā)次數(shù),避免氙燈在高壓下反復(fù)觸發(fā)。
封閉氙燈電源后,若要重新使用,請等待60秒以后重新觸發(fā)。運(yùn)行未知濃度的樣品測試時(shí),靈敏度設(shè)置請從低位向高圍(0-7)逐步設(shè)置,當(dāng)靈敏度較高時(shí)(>3),為了保護(hù)光電倍增管,請擁護(hù)勿將強(qiáng)光置進(jìn)樣品室內(nèi)。當(dāng)(僅當(dāng))操縱者錯(cuò)誤操縱或其他干擾引起微機(jī)錯(cuò)誤時(shí),應(yīng)該立即關(guān)斷主機(jī)電源,重新啟動(dòng),但無須關(guān)斷氙燈電源。單色器內(nèi)用螺絲緊固處不得松動(dòng),光學(xué)器件和儀器運(yùn)行環(huán)境需保護(hù)清潔。清潔儀器外表時(shí),請勿使用乙醇乙MI等有機(jī)溶劑,請勿在工作中清潔,不使用時(shí)請加防塵罩.比色皿保持清潔。
熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。
熒光分光光度計(jì)的基本原理:
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光。
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
熒光分光光度計(jì)的特點(diǎn):
靈敏度高,可以用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。