高效液相色譜儀色譜柱性能的評價包括評價內(nèi)容和評價方法等方面。
一、評價內(nèi)容：
1、分離效能。
2、對指定溶質(zhì)的選擇性。
3、在不同PH值介質(zhì)中的穩(wěn)定性。
4、不同批次但同型號填料間性能的重現(xiàn)性。
5、適宜的操作壓力等。
二、評價方法：
以指定的一組標準溶質(zhì)為樣品，測定其在色譜柱上的理論塔板數(shù)，作為柱效的衡量指標。
例：對于反相色譜填料，可以選擇一組具有不同極性的芳香族化合物，如苯、萘、菲、苯、甲苯和二甲苯等作為基本組分，再加以苯酚和苯胺等酸、堿性溶質(zhì)。
1、流動相的抽濾要求
色譜純試劑，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾。
2、吸濾頭
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。
3、單向閥
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取，則可能是單向閥出現(xiàn)問題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時須按其安裝的反相放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！
4、泵頭
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等)。
5、過濾片
當色譜峰出現(xiàn)異常情況時，有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
6、排液閥
此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
7、手動進樣器
平時應(yīng)注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染，一般須申請維修或更換配件。
8、流通池
在色譜峰不正常時可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進行操作或申請維修)。
9、工作站
出現(xiàn)死機可重啟計算機；不正常運行時，首先可更換電腦測試其硬件故障；或在本機上重新插撥接口、重新安裝軟件。
高效液相色譜儀分析中，選擇流動相時應(yīng)考慮流動相與填料的作用、純度、與檢測器的匹配、粘度、對樣品的溶解度和樣品回收等方面。
1、流動相與填料的作用：
流動相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)。
低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。
堿性流動相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。
酸性流動相不能用于氧化鋁和氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。
2、純度：
色譜柱的壽命與大量流動相通過有關(guān)，特別是當溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時。
3、與檢測器的匹配：
當使用UVD時，所用流動相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收或吸收很小。
當使用RID時，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動相，以提高靈敏度。
4、粘度：
高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴散和傳質(zhì)，使柱效降低，還會使柱壓增加，分離時間延長。盡量選擇沸點在100℃以下的流動相。
5、對樣品的溶解度：如果溶解度欠佳，樣品會在色譜柱內(nèi)沉淀，不但影響純化分離，而且會使色譜柱惡化。
6、樣品回收：應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。
高效液相色譜儀分析選擇流動相時應(yīng)注意的問題：
1.盡量使用高純度溶劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。不純的溶劑會引起基線不穩(wěn)，產(chǎn)生偽峰。
2.避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降和損壞色譜柱，如使固定液溶解流失和酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。
3.樣品在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。
4.流動相粘度低（粘度適中）。若使用高粘度溶劑，會增高壓力，不利于分離。常用低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度過低的溶劑也不宜采用，如戊烷等，它們?nèi)菀自谏V柱和檢測器內(nèi)形成氣泡，影響分離。
5.化學(xué)穩(wěn)定性好。
6.流動相應(yīng)滿足檢測器的要求。
對于紫外吸收檢測器，應(yīng)注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長長。所謂溶劑的紫外截止波長是指當小于截止波長的輻射通過溶劑時，溶劑對此輻射產(chǎn)生強烈吸收，此時溶劑被看作是光學(xué)不透明的，會嚴重干擾組分的吸收測量。
對于示差折光檢測器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相，以達到zui高靈敏度。
液相色譜儀，看你分離的樣品的種類，看流動相是否和樣品互溶，分離程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多種，看樣品的沸點，溶解性。
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