光源：指的是發(fā)光的物體。理想的光源應(yīng)能提供連續(xù)輻射，光的強(qiáng)度必須足夠大，并且在整個(gè)光譜區(qū)內(nèi)其強(qiáng)度不應(yīng)隨波長(zhǎng)有明顯變化。當(dāng)然理想的光源是不存在的，沒(méi)有那種光源能在所有波長(zhǎng)點(diǎn)提供足夠強(qiáng)大而且穩(wěn)定的光輻射。所以根據(jù)不同的波長(zhǎng)，要采用不同的光源。
鎢燈：320－1100nm（可見(jiàn)區(qū)）
氘燈：190－400nm（紫外區(qū)）
單色器：是一種用來(lái)把來(lái)自光源的混合光分解為單色光并能隨意改變波長(zhǎng)的裝置。它主要有入射狹縫、出射狹縫、色散元件和準(zhǔn)直鏡組成，其中色散元件是最關(guān)鍵的，因?yàn)樗馁|(zhì)量決定了單色器質(zhì)量的優(yōu)劣。
試樣室：用來(lái)擱放測(cè)試樣品的一個(gè)暗盒裝置。
光電轉(zhuǎn)換器：把微弱的光信號(hào)轉(zhuǎn)變成微弱的電信號(hào)。能檢測(cè)通過(guò)測(cè)試溶液與參比溶液的光強(qiáng)度，并以電信號(hào)顯示出來(lái)，用于體現(xiàn)測(cè)試溶液與參比溶液的光強(qiáng)度比值。通常紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)使用的檢測(cè)器有硅光電池、光電管和光電倍增管，今天由于半導(dǎo)體技術(shù)的迅速發(fā)展，光電池的性能越來(lái)越好，且光電倍增管的價(jià)格越來(lái)越低，所以光電管逐漸被淘汰了。
前置放大器：一般由高阻抗集成運(yùn)算放大器組成，完成微電流(電壓)的放大。
直流穩(wěn)壓電源：組成不同電壓(電流)的直流工作電源，滿足儀器各個(gè)負(fù)載需求。
顯示器：LED、LCD電壓表組成。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)于我們來(lái)說(shuō)熟悉卻也比較難讀懂理解的。
天天有人提起他的名字卻沒(méi)多少人知道他的工作原理。
下面我們來(lái)淺談一下。
光譜工作原理：
分子的紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同；
因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線；
可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比；
如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。
若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。
如果沒(méi)有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。
這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測(cè)定條件要相同。
實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同;
這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作環(huán)境：
1）分光光度計(jì)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5-35℃，相對(duì)濕度不超過(guò)85%
2）儀器應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，且避免強(qiáng)烈的震動(dòng)或持續(xù)的震動(dòng)
3）室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)，且應(yīng)避免直射日光的照射
4）電扇不宜直接向儀器吹風(fēng)，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用
5）盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電氣設(shè)備
6）避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場(chǎng)所使用
一、光源部分：
?。?）故障：鎢燈不亮；
原因：鎢燈燈絲燒斷（此種原因幾率最高）；
檢查：鎢燈兩端有工作電壓，但燈不亮；取下鎢燈用萬(wàn)用表電阻檔檢測(cè)。
處置：更換新鎢燈；
?。?）故障：鎢燈不亮；
原因：沒(méi)有點(diǎn)燈電壓；
檢查：保險(xiǎn)絲被熔斷；
處置：更換保險(xiǎn)絲，（如更換后再次燒斷則要檢查供電電路）；
?。?）故障：氘燈不亮；
原因：氘燈壽命到期（此種原因幾率最高）；
檢查：燈絲電壓、陽(yáng)極電壓均有，燈絲也可能未斷（可看到燈絲發(fā)紅）；
處置：更換氘燈；
?。?）故障：氘燈不亮；
原因：氘燈起輝電路故障；
檢查：氘燈在起輝的過(guò)程中，一般是燈絲先要預(yù)熱數(shù)秒鐘，然后燈的陽(yáng)極與陰極間才可起輝放電，如果燈在起輝的開(kāi)始瞬間燈內(nèi)閃動(dòng)一下或連續(xù)閃動(dòng)，并且更換新的氘燈后依然如此，有可能是起輝電路有故障，燈電流調(diào)整用的大功率晶體管損壞的幾率最大。
二、信號(hào)部分：
?。?）故障：沒(méi)有任何檢測(cè)信號(hào)輸出；
原因：沒(méi)有任何光束照射到樣品室內(nèi)；
檢查：將波長(zhǎng)設(shè)定為530nm，狹縫盡量開(kāi)到最寬檔位，在黑暗的環(huán)境下用一張白紙放在樣品室光窗出口處，觀察白紙上有無(wú)綠光斑影像；
處置：檢查光源鏡是否轉(zhuǎn)到位？雙光束儀器的切光電機(jī)是否轉(zhuǎn)動(dòng)了（耳朵可以聽(tīng)見(jiàn)電機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)的聲音）？
?。?）故障：樣品室內(nèi)無(wú)任何物品的情況下，全波長(zhǎng)范圍內(nèi)基線噪聲大；
原因：光源鏡位置不正確、石英窗表面被濺射上樣品；
檢查：觀察光源是否照射到入射狹縫的中央？石英窗上有無(wú)污染物？
處置：重新調(diào)整光源鏡的位置，用乙醇清洗石英窗；
（3）故障：樣品室內(nèi)無(wú)任何物品的情況下，僅僅是紫外區(qū)的基線噪聲大；
原因：氘燈老化、光學(xué)系統(tǒng)的反光鏡表面劣化、濾光片出現(xiàn)結(jié)晶物；
檢查：可見(jiàn)區(qū)的基線較為平坦，斷電后打開(kāi)儀器的單色器及上蓋，肉眼可以觀察到光柵、反光鏡表面有一層白色霧狀物覆蓋在上面；如果光學(xué)系統(tǒng)正常，最大的可能是氘燈老化，可以通過(guò)能量檢查或更換新燈方法加以判斷；
處置：更換氘燈、用火棉膠粘取鏡面上的污物或用研磨膏研磨濾光片（注意：此種技巧需要有一定維修經(jīng)驗(yàn)者來(lái)實(shí)施）；
（4）故障：樣品室放入空白后做基線記憶，噪聲較大，紫外區(qū)尤甚；
原因：比色皿表面或內(nèi)壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白樣品對(duì)紫外光譜的吸收太強(qiáng)烈，使放大器超出了校正范圍；
檢查：將波長(zhǎng)設(shè)定為250nm，先在不放任何物品的狀態(tài)下調(diào)零，然后將空比色皿插入樣品道一側(cè)，此時(shí)吸光值應(yīng)小于0.07Abs；如果大于此值，有可能是比色皿不干凈或使用了玻璃比色皿；同樣方法也可判斷空白溶液的吸光值大?。?/p>
處置：清洗比色皿，更換空白溶液；
（5）故障：吸光值結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值（常見(jiàn)）；
原因：沒(méi)做空白記憶、樣品的吸光值小于空白參比液；
檢查：將參比液與樣品液調(diào)換位置便知；
處置：做空白記憶、調(diào)換參比液或用參比液配置樣品溶液；
?。?）故障：樣品信號(hào)重現(xiàn)性不良；
原因：排除儀器本身的原因外，最大的可能是樣品溶液不均勻所致；在簡(jiǎn)易的單光束儀器中，樣品池架一般為推拉式的，有時(shí)重復(fù)推拉不在同一個(gè)位置上；
檢查：更換一種穩(wěn)定的試樣判定；
處置：采取正確的試樣配置手段；修理推拉式樣品架的定位碰珠；
（7）故障：做基線掃描或樣品掃描時(shí)，基線或信號(hào)有一個(gè)大的負(fù)脈沖；
原因：掃描速度設(shè)置得過(guò)快，信號(hào)在讀取時(shí)，誤將濾光片或光源鏡的切換當(dāng)做信號(hào)讀取了；
檢查：改變掃描速度；
（8）故障：做基線掃描或樣品掃描時(shí)，基線或信號(hào)有一個(gè)長(zhǎng)時(shí)間段的負(fù)值或滿屏大噪聲；
原因：濾光片飼服電機(jī)“失步”，造成檔位錯(cuò)位，國(guó)產(chǎn)電機(jī)尤甚；
檢查：重新開(kāi)機(jī)有可能回復(fù)，或打開(kāi)單色器對(duì)照波長(zhǎng)與濾光片的相對(duì)位置來(lái)檢查（注意：打開(kāi)單色器時(shí)要保護(hù)檢測(cè)器不被強(qiáng)光刺激）；
處置：更換飼服電機(jī)；
（9）故障：樣品出峰位置不對(duì)；
原因：波長(zhǎng)傳動(dòng)機(jī)構(gòu)產(chǎn)生位移；
檢查：通過(guò)氘燈的656.1nm的特征譜線來(lái)判斷波長(zhǎng)是否準(zhǔn)確；
處置：對(duì)于高檔儀器而言處理手段相對(duì)簡(jiǎn)單，使用儀器固有的自動(dòng)校正功能即可；而對(duì)于相對(duì)簡(jiǎn)單的儀器，這種調(diào)整則需要專業(yè)人員來(lái)進(jìn)行了；
?。?0）故障：信號(hào)的分辨率不夠，具體表現(xiàn)是：本應(yīng)疊加在某一大峰上的小峰無(wú)法觀察到；
原因：狹縫設(shè)置過(guò)窄而掃描速度過(guò)快，造成檢測(cè)器響應(yīng)速度跟不上，從而失去應(yīng)測(cè)到的信號(hào)；按常理，一定的狹縫寬度要對(duì)應(yīng)一定范圍的掃描速度；或者狹縫設(shè)置得過(guò)寬，使儀器的分辨率下降，將小峰融合在大峰里了。
檢查：放慢掃描速度看一看或?qū)ⅹM縫設(shè)窄；
處置：將掃描速度、狹縫寬窄、時(shí)間常數(shù)三者擬合成一個(gè)優(yōu)化的條件；
?。?1）故障：當(dāng)儀器波長(zhǎng)固定在某個(gè)波長(zhǎng)下時(shí)，吸光值信號(hào)上下擺動(dòng)，特別是測(cè)量模式轉(zhuǎn)換為按鍵開(kāi)關(guān)式的簡(jiǎn)易儀器；
原因：開(kāi)關(guān)觸點(diǎn)因長(zhǎng)期氧化所致造成接觸不良；
檢查：用手加重力量按琴鍵時(shí)，吸光值隨之變化；
處置：用金屬活化劑清洗按鍵觸點(diǎn)即可；
?。?2）故障：儀器零點(diǎn)飄忽不定，主要反映在簡(jiǎn)易儀器上；
原因：在簡(jiǎn)易儀器中，零點(diǎn)往往是通過(guò)電位器來(lái)調(diào)整，這種電位器一般是炭膜電阻制作的，使用久了往往造成接觸不良；
處置：更換電位器；
還有一點(diǎn)補(bǔ)充一下,如果是PC連接UV時(shí),同志們一定注意接口板別不小心被擊穿,一定要關(guān)機(jī)后拔插.若可見(jiàn)部分穩(wěn)定性不好，有可能是鎢燈的供電電壓不穩(wěn)，一般鎢燈電源是穩(wěn)壓電路。
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