(1)照明:
室內(nèi)照明要光線適中,避免陽(yáng)光直射。為避開直射光線對(duì)儀器操作、觀測(cè)的影響,儀器(顯示屏)應(yīng)側(cè)向光線。實(shí)驗(yàn)室窗戶要掛窗簾,以便隨時(shí)調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度。
(2)通風(fēng):
使用液相色譜儀分析過程中,由于流動(dòng)相中含有揮發(fā)性有機(jī)溶劑(甲醇、乙睛等)會(huì)產(chǎn)生有害氣體,對(duì)儀器中的光學(xué)元件帶來腐蝕,應(yīng)注意儀器室的通風(fēng),以排除室內(nèi)有害氣體、保持空氣清新。
通風(fēng)主要有兩種方式:一種自然通風(fēng),定時(shí)打開門窗,讓內(nèi)外空氣對(duì)流;另一種是強(qiáng)制通風(fēng),如用通風(fēng)柜、排風(fēng)扇等,及時(shí)將有害氣體排出室外。
(3)環(huán)境溫度和濕度:
適宜的溫度和濕度是保障HPLC儀正常運(yùn)行、性能穩(wěn)定的必要條件。
HPLC儀一般要求室溫在20一30℃之間,日溫度變化2一3℃,不要波動(dòng)太大,否則,在開機(jī)分析時(shí)會(huì)影響色譜分離;
夏季一定要控制室溫不要超過30℃,溫度太高會(huì)使流路系統(tǒng)產(chǎn)生氣泡,影響檢測(cè)器的正常工作(如熒光檢測(cè)器)。室內(nèi)相對(duì)濕度應(yīng)控制在60%以下。
?。?)供電:
液相色譜室應(yīng)設(shè)有照明電源和動(dòng)力電源,動(dòng)力電可供儀器運(yùn)行使用。為減少噪音的干擾,儀器應(yīng)遠(yuǎn)離瞬時(shí)供電的大功率電器設(shè)備,如:大型電動(dòng)設(shè)備(超低溫冰箱、電烤箱等)、電梯、空調(diào)系統(tǒng)等。為保證HPLC輸液泵的精度,必須要保證穩(wěn)定的輸人電壓,為此,建議色譜室應(yīng)設(shè)有和儀器負(fù)荷相當(dāng)?shù)姆€(wěn)壓電源。室內(nèi)墻上應(yīng)安裝有接地電阻符合要求的地線,用于儀器設(shè)備保護(hù)性接地的公用地線接地電阻≤4Ω。
?。?)潔凈度:
懸浮于空氣中的顆粒物質(zhì)會(huì)對(duì)色譜儀器分析帶來干擾,使本底和噪聲升高,成為分析測(cè)試的污染源,直接影響高純物質(zhì)的純度與痕量雜質(zhì)的分析。
早期使用隔膜和停流進(jìn)樣器,裝在色譜柱進(jìn)口處?,F(xiàn)在大都使用六通進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器。
進(jìn)樣裝置要求:密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式可分為:隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。
1.隔膜進(jìn)樣。
用微量注射器將樣品注進(jìn)專門設(shè)計(jì)的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi),可把樣品直接送到柱頭填充床的中心,死體積幾乎即是零,可以獲得較佳的柱效,且價(jià)格便宜,操縱方便。但不能在高壓下使用(如10MPa以上);此外隔膜輕易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng),使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1~2%;加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到,常規(guī)分析使用受到限制。
2.停流進(jìn)樣。
可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新啟動(dòng)時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)“鬼峰”;另一缺點(diǎn)是保存時(shí)間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號(hào)控制餾分收集的制備色譜中,效果較好。
3.閥進(jìn)樣。
一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥(以美國(guó)Rheodyne公司的7725和7725i型常見),其關(guān)鍵部件由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在,柱效率低于隔膜進(jìn)樣(約下降5~10%左右),但耐高壓(35~40MPa),進(jìn)樣量正確,重復(fù)性好(0.5%),操縱方便。
4.自動(dòng)進(jìn)樣。
用于大量樣品的常規(guī)分析。
幾乎所有液相色譜儀接頭故障都是可以避免的,按下列要求可以有效地預(yù)防接頭的故障。
1、使用液相色譜儀儀器設(shè)計(jì)時(shí)的部件。
不同廠家連接管伸出刃環(huán)的長(zhǎng)度不完全相同,混用容易導(dǎo)致漏液、螺紋損壞、色譜柱進(jìn)出口及檢測(cè)器進(jìn)液口螺母破壞等,連接管在螺母中沒有良好密封也會(huì)導(dǎo)致漏液、死體積增加等。建議可以不要互換使用不同廠家生產(chǎn)的接頭和刃環(huán)。
2、按要求組裝和擰緊接頭,不可擰得過緊。
低壓接頭的故障主要有接頭松動(dòng)、管頭損壞、螺紋“滑絲”、擰過頭。低壓接頭用手上緊,加上鎖緊螺絲可減少以上故障的發(fā)生,一旦發(fā)現(xiàn)低壓接頭損壞,應(yīng)重新?lián)Q新的。高壓接頭的故障與低壓接頭差不多,污染和裝置不當(dāng)也常有發(fā)生,
3、使用合適的工具。
在擰緊接頭的時(shí)候一定要仔細(xì),過緊可能會(huì)損壞螺紋、刃環(huán)等,引起漏液,最糟糕的是會(huì)使接頭斷在螺母內(nèi)部。使用手?jǐn)Q緊接頭,不需要任何工具就可以密封。旋緊接頭時(shí)可以要用死扳手,不用活扳手,保證不損壞接頭。
4、接頭的清潔。
組裝與拆卸接頭時(shí)要檢查在密封面上有無微粒和無機(jī)鹽晶體。這些污染物影響密封性能,更嚴(yán)重的會(huì)使螺絲咬死。