液相色譜儀由高壓液體泵分離系統(tǒng)、檢測器及液相色譜柱（含柱溫控制系統(tǒng)）等三部分組成。其中液相色譜柱的正確使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵，也是采用液相色譜方法獲得準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必由之路。
一套無論多么完美的液相色譜儀，如果得不到優(yōu)質(zhì)的色譜柱支持，也只能成為一臺(tái)液體輸送泵而已，毫無價(jià)值可言。反之，一根無論多么好的色譜柱，如果得不到完美的液相色譜儀的控制，其作用與價(jià)值也會(huì)大打折扣。所以，液相色譜儀的性能決定了液相色譜的技術(shù)控制性能和數(shù)據(jù)采集與處理性能；液相色譜柱的性能直接關(guān)系到分離分析的準(zhǔn)確性與適用性，必須達(dá)到很高的性能才能為科學(xué)實(shí)驗(yàn)提供強(qiáng)有力的數(shù)據(jù)支持。二者必然相互影響相互促進(jìn)。
液相色譜柱的結(jié)構(gòu)及主要功能:
液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。
柱管：多用不銹鋼制成，若果使用時(shí)柱壓不高于70kg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。
壓帽：即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。
密封環(huán)：位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
篩板：位于色譜柱兩端緊貼柱管端的篩網(wǎng)狀薄片，由燒結(jié)不銹鋼或鈦合金制成，孔徑取決于填料粒度，一般為0.2~20&um(5~10&um)。用于防止填料從柱管內(nèi)漏出。
接頭：柱兩端連接流動(dòng)相與柱管的中空環(huán)套，由不銹鋼制成。用于柱管路聯(lián)通與柱端高壓固定。
封頭：柱兩端的密封螺絲，用于保存色譜柱時(shí)封頭。
柱填料：裝填于柱管內(nèi)的固定相擔(dān)體，其直接決定了色譜柱的類型與用途，是色譜柱的核心。多為無定形或球形硅膠基質(zhì)，也有環(huán)糊精、活性炭、聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚甲基丙酸酯、氧化鋁等基質(zhì)。用于色譜分離。
色譜柱是運(yùn)用于色譜儀系統(tǒng)中起著分離作用的儀器，是色譜儀分析系統(tǒng)的核心部件，色譜柱柱效的高低影響著檢測速率的快慢以及檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，為了提高色譜柱的柱效，保證液相色譜儀分析檢測的靈敏性，了解液相色譜柱的選購技巧尤為重要。
選擇液相色譜柱時(shí)需要考慮的主要因素包括：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量，下面來一一介紹：
1、鍵合相：
確定了正反相后基本就簡單了，正相很簡單，我們重點(diǎn)討論下反相，C18主要分離非極性和弱極性物質(zhì)，因?yàn)槭擎I合硅膠，所以C18也分好幾種有常規(guī)的如C18-A，耐純水的OLAppleC18-AQ、耐酸堿的OLAppleC18-EX等，如果發(fā)現(xiàn)C18保留很弱，調(diào)整流動(dòng)相也不行，這個(gè)時(shí)候可以考慮C8甚至C4等。
2、粒徑：
色譜法追求的是高效、高分辨、高速等。目前來說亞2um填料或者2UM核殼填料是很理想的模型，基本具備“三高”特征尤其是高速，線速度不在影響分離度，不過附帶的缺點(diǎn)就是高壓，要升級(jí)相應(yīng)的硬件，成本高昂，需要謹(jǐn)慎考慮。5um填料較為普遍，目前來說完全可以勝任各種日常檢測，即使有特殊要求，3um色譜填料基本上也能全覆蓋，不過該模型下線速度和分離度是成反比的。
3、孔徑：
目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。開孔的填料多了個(gè)類似分子篩功能，所以選擇孔徑一定要關(guān)注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔徑都很小，可以縮短樣品路徑。所以國際上還有無孔硅膠柱子，也很適合蛋白分離，徹底解決蛋白分子量大和太粘稠堵住孔徑問題。
4、碳載量：
快速柱碳載量很低，如A家等，省時(shí)間，省溶劑，但分析部分復(fù)雜樣品如中藥等有點(diǎn)力不從心，這個(gè)時(shí)候可以考慮英國OLApple色譜柱，碳載量15~23%，碳載量數(shù)值就像河床的水草，越高代表越密集，保留樣品能力越強(qiáng)，越有可能分離開難分離物質(zhì)。
在日常分析工作中，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。
1、柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。
2、如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類不多，但分析次數(shù)比較多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。
3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)對柱內(nèi)填料產(chǎn)生沖擊力，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
4、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
5、使用柱溫箱時(shí)，應(yīng)注意在流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱后才能開啟柱溫箱升溫。
6、一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
7、選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
8、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
9、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。
10、保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿色譜級(jí)的乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置一個(gè)晚上或更長時(shí)間。
11、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
12、在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī)，需及時(shí)對色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般30分鐘以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
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