1、一般定性
用已知物和直接對(duì)照法定性，這是一種相對(duì)可靠的方法，主要可以分為以下四種：
1）保留時(shí)間和保留體積
2）相對(duì)保留值
3）已知物增加峰高法
4）雙柱貨雙體系
實(shí)驗(yàn)表明，各類同系物在兩根不同柱上的Vg值有如下關(guān)系：
式中：VgI表示在柱I上的比保留體積；VGII表示在柱II上的比保留體積；A1與C1為常數(shù)。
從上式可以看出，同系物在兩個(gè)性質(zhì)不同的色譜柱上，比保留體積Vg的對(duì)數(shù)有線性關(guān)系，下圖就是根據(jù)某些化合物和領(lǐng)苯二甲酸二異葵酯柱上的比保留體積的對(duì)數(shù)制作出的。
經(jīng)過(guò)領(lǐng)苯二甲酸二異葵酯柱分離后，在lgvgII為1.8的位置上有一個(gè)未知峰，由圖可看出有兩種可能性，即酮與伯醇；此時(shí)，將樣品在柱上I上進(jìn)行分離，得到lgVgII為1.62的色譜峰，從而可確定該峰是酮而不是醇。
在液相色譜中，可用雙體系定性，通過(guò)改變流動(dòng)相和固定相，從而改善分離的選擇性，通常改用與原色譜體系有較大差別的其他色譜體系來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。
2、保留值分隨份子結(jié)構(gòu)或性質(zhì)變化的規(guī)律
1）GC中的碳數(shù)規(guī)律：同系物間，在一定溫度下，保留值變化遵循如下規(guī)律：
2）GC中的沸點(diǎn)規(guī)律：同族具有相同碳原子數(shù)目的同分異構(gòu)體間存在如下關(guān)系：
3)LC中的保留值規(guī)則：對(duì)于份子中存在不同數(shù)目的重復(fù)官能團(tuán)的化合物，有如下的經(jīng)驗(yàn)公式：
3、反向液譜的定性
在氣譜中廣泛使用的Kovats指數(shù)定性，在夜譜中，由于組分的保留行為不僅與固定相有關(guān)，還與流動(dòng)相的種類及濃度有關(guān)，所以不能直接用同系物間，在一定溫度下，保留值變化遵循如下規(guī)律指數(shù)定性。
4、計(jì)算機(jī)檢索
計(jì)算機(jī)不僅都能貯存大量保留指數(shù)，而且還可以將庫(kù)中標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為用戶色譜條件下保留指數(shù)和tR值，靠檢索功能定性。
5、色譜中的輔助技術(shù)
液相色譜，對(duì)于未知物結(jié)構(gòu)的確定，也常常使用一些輔助技術(shù)，常用的有質(zhì)譜，紅外，核磁等。
使用非在線聯(lián)用技術(shù)時(shí)，首先將色譜分離后的純樣品收集。
色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透性，延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。色譜柱壓升高一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了雜質(zhì)，造成流體阻力加大所致。這兩個(gè)原因，大致又可以分為以下幾方面：
1、流動(dòng)相的前處理
雜質(zhì)堵塞色譜柱進(jìn)口濾片，導(dǎo)致壓力升高。這是由于流動(dòng)相可能沒有過(guò)濾，或過(guò)
濾不徹底，使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所致。
2、樣品的沉淀
當(dāng)溶解樣品的溶劑與流動(dòng)相不一致時(shí)，樣品進(jìn)入色譜柱時(shí)，可能因溶解度降低而沉淀出來(lái)，
造成壓力升高。
3、晶體的析出
使用含有緩沖液的流動(dòng)相時(shí)，緩沖液中的無(wú)機(jī)鹽可能會(huì)殘留在體系之中，它們會(huì)因在新流動(dòng)
相中的溶解度降低而析出，造成流體阻力加大、壓力升高。
4、細(xì)菌或霉菌孳生
霉菌在流動(dòng)相中、管路中或柱子進(jìn)口處繁殖、生長(zhǎng)堵塞濾板，導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷
酸鹽緩沖液時(shí)一般要現(xiàn)配現(xiàn)用。
5、溶質(zhì)吸附
當(dāng)溶質(zhì)在柱子上有較強(qiáng)的吸附，且所用的流動(dòng)相難以將它們洗脫時(shí)，累積的未洗脫溶質(zhì)也會(huì)
造成阻力增大和壓力升高。
6、流動(dòng)相更換過(guò)度較快
當(dāng)改變流動(dòng)相體系時(shí)，不徹底的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動(dòng)相存在于同一個(gè)體系之中，也會(huì)造成壓力升高。
7、壓力脈沖
運(yùn)行過(guò)程中，有時(shí)會(huì)產(chǎn)生系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如此所形成的壓力脈沖會(huì)造成多孔填料的
崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化，填料微屑的長(zhǎng)期積累也可能會(huì)使柱床阻力增大，造成壓力升高。
處理對(duì)于緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)的情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速?zèng)_洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;
對(duì)于樣品污染沉積的情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
當(dāng)樣品定量管經(jīng)過(guò)充分的沖洗后，可以將旋柄轉(zhuǎn)回取樣位置(Load)，也可以繼續(xù)保持在進(jìn)樣位置，到下次取樣前才切換回取樣位置。在切換回取樣位置時(shí)，將樣品進(jìn)樣針或微量樣品進(jìn)樣針從進(jìn)樣閥中拔出。
為防止交叉污染，正常情況下不必每次進(jìn)樣后都沖洗進(jìn)樣閥注射針導(dǎo)入口。進(jìn)樣閥內(nèi)根據(jù)專利設(shè)計(jì)的直接連接進(jìn)樣孔，可以使注射針頭的前端直接連接到樣品定量管的末端，沒有其他空間供樣品殘留。這樣在下一次進(jìn)樣時(shí)，就不會(huì)有上一次殘留的樣品進(jìn)入樣品定量管。
但是在進(jìn)樣針頭插入或拔出過(guò)程中，會(huì)有痕量的樣品沉積在針頭密封區(qū)域。精密的測(cè)定顯示這種殘留有1nL ~ 10nL。這表明進(jìn)20μL樣品，會(huì)殘留0.005% ~ 0.05%。每次進(jìn)樣后沖洗注射針導(dǎo)入口可以將此殘留沖洗干凈。沖洗注射針導(dǎo)入口的過(guò)程為：設(shè)定流動(dòng)相的流速為0.1mL/min ~ 1mL/min，將注射針導(dǎo)入口沖洗頭(Rheodyne部件號(hào)7125-054)連接到一只體積相對(duì)較大的注射器上，用大量的流動(dòng)相只在進(jìn)樣位置清洗注射針導(dǎo)入口。這樣進(jìn)入進(jìn)樣閥中的液體繞過(guò)樣品定量管由樣品溢出管5# 口排出。這一過(guò)程可以將注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈徹底清洗。而采用注射器完全插入式的沖洗方式，則不能全部清洗上述部分的表面。在取樣位置將注射針插入注射針導(dǎo)入口時(shí)，針頭推動(dòng)注射針密封圈內(nèi)少量樣品液體(上一次沖洗注射針導(dǎo)入管留下的)進(jìn)入樣品定量管。當(dāng)該樣品液體與所用的流動(dòng)相組成不同，且同時(shí)采用部分充滿定量管進(jìn)樣方式時(shí)，在高靈敏度的檢測(cè)器上可能出現(xiàn)怪峰。所以沖洗注射針時(shí)可以用流動(dòng)相沖洗。
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