物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構,其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。
紫外可見分光光度法的定量分析基礎是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質在一定濃度的吸光度與它的吸收介質的厚度呈正比。
紫外可見分光光度計主要應用:
1、檢定物質
根據吸收光譜圖上的一些特征吸收,特別是最大吸收波長雖ax和摩爾吸收系數是檢定物質的常用物理參數。這在藥物分析上就有著很廣泛的應用。在國內外的藥典中,已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收系數載入其中,為藥物分析提供了很好的手段。
2、與標準物及標準圖譜對照
將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質,則兩者的光譜圖應完全一致。如果沒有標樣,也可以和現成的標準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確,精密度高,且測定條件要相同。
3、比較最大吸收波長吸收系數的一致性
4、純度檢驗
5、推測化合物的分子結構
6、氫鍵強度的測定
實驗證明,不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同,這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度,以確定選擇哪一種溶劑。
7、絡合物組成及穩(wěn)定常數的測定
8、反應動力學研究
9、在有機分析中的應用
有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑒別及組成結構測定的科學,它是在有機化學和分析化學的基礎上發(fā)展起來的綜合性學科。
紫外可見分光光度計是由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。光源的功能是提供足夠強度的、穩(wěn)定的連續(xù)光譜。
紫外光區(qū)通常用氫燈或氘燈,見光區(qū)通常用鎢燈或鹵鎢燈。單色器的功能是將光源發(fā)出的復合光分解并從中分出所需波長的單色光。色散元件有棱鏡和光柵兩種。
紫外可見分光光度計特點:
1、采用同步正弦機構,波長準確度高,重復性好
2、24位高速、高精度A/D轉換,儀器具有極高的靈敏度和反應速度
3、能直接建立標準曲線,并可用標準曲線進行相關的測試,可連續(xù)測試和存儲200組數據,并可存儲200條標準曲線,用戶可根據編號方便調用,測試數據可斷電保持
4、波長自動校準、自動設定、偏差自我修復
5、插座式鎢燈、氘燈設計,換燈免光學調試
6、采用懸架式光學系統(tǒng)設計,整體光路固定在8mm厚的切削鋁制無變形基座上,底板的變形和外界的震動對光學系統(tǒng)不產生任何影響,從而大大提高了儀器的穩(wěn)定性和可靠性
7、標配元析公司的掃描軟件可直接完成光度測量、定量測試、定性測試、動力學測試、多波長測試、DNA/蛋白質測試及數據圖譜的處理。
可見分光光度計的波長適用范圍一般從350nm左右開始到1100nm左右,紫外可見分光光度計的波長適用范圍一般從190nm到1100nm.從這點區(qū)別上看就是波長的適用范圍不一樣,紫外可見分光光度計多了從190到350nm左右這段波長.正式由于這段紫外光的區(qū)別,就決定了他們的儀器結構部件有一些不同了,他們的不同之處主要在于以下幾個地方:
1、光源不同:可見分光光度計的光源一般只用鎢燈,而紫外可見分光光度計是用鎢燈 氘燈兩個光源,同時還多了這兩個光源燈的切換部件.這是因為鎢燈的光譜范圍主要在可見到近紅外這段,氘燈主要在紫外端.也正是因為光源的不一樣,紫外可見分光光度計也多了一個專門提供氘燈工作的氘燈電源了。
2、光學器件的不同:由于玻璃能吸收紫外波,而對可見到近紅外端有比較好的透過性,所以可見分光光度計的一些光學部件可以使用玻璃,而紫外可見分光光度計就不能使用玻璃部件,一般使用石英光學部件.同時由于這個原因,在比色皿的選擇上也就有不同了,可見分光光度計可以使用玻璃制的比色皿,而紫外可見分光光度計一般使用石英制的比色皿了。
3、接收器的不同:由于紫外可見分光光度計多了紫外波,所以在接收器的選擇上也就不一樣了.多了對紫外波的靈敏響應功能,這類接收器的價格就比可見分光光度計的接收器貴了很多了。
維修:儀器使用一定時間后,會積累一些污垢,可以由專業(yè)的維修師指定下進行維護,最后再恢復原狀,檢測、調校、記錄。
在紫外分光光度計的測試指標中準確度是至關重要的,只有保證了準確度才能保證樣品數據的準確性和真實性。
影響紫外可見分光光度計準確度的因素有:
?。?)波長準確度。波長準確度在確保紫外可見分光光度計的準確度中起著十分重要的作用。因為測試樣品物質不同,那么它對不同波長的光有著不同的摩爾吸光系數。由朗伯比爾定律可知,不同的摩爾吸光系數所對應的吸光度會有差異,由此就會產生不一致的分析誤差。
?。?)雜散光。雜散光是準確度分析誤差的一個重要來源,直接影響著樣品物質在測試時所能配制的最大濃度。有研究結果表明,越高濃度的測試樣品雜散光的影響越大,如果是在一個比較大的濃度下,雜散光增強,吸光度和濃度成比例的范圍縮小。
?。?)噪聲。影響紫外可見分光光度計光度準確度的噪聲包括光噪聲和電噪聲。其中光噪聲是由光源產生的,具體來說就是光源的發(fā)光強度分布因子導致光噪聲的出現。電噪聲的來源是光電倍增管、各種電源以及放大器等。作為紫外可見分光光度計光度準確度最關鍵的技術參數之一,噪聲是分析測試中主要誤差源頭,它是影響紫外可見分光光度計光度準確度檢測下限的因素。
?。?)基線平直度。基線平直度是全波段內每個波長上的噪聲體現,基線平直度直接影響紫外可見分光光度計光度準確度的靈敏度以及影響檢測下限或使用范圍,是紫外可見分光光度計中一個十分重要的技術參數。購買者和使用者在選購和使用紫外可見分光光度計的時候,對基線平直度會有這特別的重視程度,會作為選購和使用的重要技術指標。但是相對于其他影響紫外可見分光光度計光度準確度的因素來說,基線平直度是受到目前國內外研究工作者重視程度遠遠不夠的技術指標。
?。?)光譜帶寬。光譜帶寬是影響紫外可見分光光度計光度準確度的一個十分重要的因素。當光譜帶寬不同時,測試得到的數據就會不同,因而不同光譜帶寬下的分析誤差也大相徑庭。
上一篇:電磁流量計接地環(huán)和保護環(huán)及操作...
下一篇:冷熱沖擊試驗箱技術參數