由泵將儲(chǔ)液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，經(jīng)流量與壓力測量之后，導(dǎo)入進(jìn)樣器。被測物由進(jìn)樣器注入，并隨流動(dòng)相通過色譜柱，在柱上進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測器，檢測信號(hào)由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復(fù)雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而高效液相色譜儀改變的是流動(dòng)相極性，使樣品各組分在較佳條件下得以分離。
1、眾所周知，液體對(duì)于氣體是有一定的溶解度的。液體的壓力越高，對(duì)氣體的溶解度越好。所以，當(dāng)一瓶未開封靜置的可樂，你是看不到氣泡的，因?yàn)闅馀荻既芙庠诶锩媪恕．?dāng)你開啟瓶蓋，直接的影響就是瓶子里面的壓力降低了，對(duì)氣體的溶解度變小，所以氣體就析出變成一個(gè)個(gè)的小氣泡。
2、喝過啤酒或者碳酸飲料的人都有這樣的經(jīng)歷，當(dāng)你搖晃瓶子，然后瞬間把瓶蓋開啟，啤酒或碳酸飲料瓶中會(huì)噴出大量泡沫，搖晃的越劇烈，噴射的越猛，不難看出，溶解氣體的液體在振蕩和運(yùn)動(dòng)過程中，也容易讓氣泡析出。
3、上學(xué)的時(shí)候，化學(xué)課上，我們?cè)?jīng)懷疑過一個(gè)問題：把一升甲醇倒進(jìn)一生純水里面，高效液相色譜儀的體積是不是兩升？當(dāng)我們親自試驗(yàn)后，就排除了這個(gè)疑問，而且我們可以明顯看到，當(dāng)兩種液體混合的時(shí)候，會(huì)有大量的氣泡冒出，體積也小于兩升。
高效液相色譜儀分析中，選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)考慮流動(dòng)相與填料的作用、純度、與檢測器的匹配、粘度、對(duì)樣品的溶解度和樣品回收等方面。
1、流動(dòng)相與填料的作用：
流動(dòng)相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)。
低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會(huì)溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。
堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。
酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁和氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。
2、純度：
色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過有關(guān)，特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。
3、與檢測器的匹配：
當(dāng)使用UVD時(shí)，所用流動(dòng)相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收或吸收很小。
當(dāng)使用RID時(shí)，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相，以提高靈敏度。
4、粘度：
高粘度溶劑會(huì)影響溶質(zhì)的擴(kuò)散和傳質(zhì)，使柱效降低，還會(huì)使柱壓增加，分離時(shí)間延長。盡量選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動(dòng)相。
5、對(duì)樣品的溶解度：如果溶解度欠佳，樣品會(huì)在色譜柱內(nèi)沉淀，不但影響純化分離，而且會(huì)使色譜柱惡化。
6、樣品回收：應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。
高效液相色譜儀分析選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的問題：
1.盡量使用高純度溶劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。不純的溶劑會(huì)引起基線不穩(wěn)，產(chǎn)生偽峰。
2.避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降和損壞色譜柱，如使固定液溶解流失和酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。
3.樣品在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。
4.流動(dòng)相粘度低（粘度適中）。若使用高粘度溶劑，會(huì)增高壓力，不利于分離。常用低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度過低的溶劑也不宜采用，如戊烷等，它們?nèi)菀自谏V柱和檢測器內(nèi)形成氣泡，影響分離。
5.化學(xué)穩(wěn)定性好。
6.流動(dòng)相應(yīng)滿足檢測器的要求。
對(duì)于紫外吸收檢測器，應(yīng)注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長長。所謂溶劑的紫外截止波長是指當(dāng)小于截止波長的輻射通過溶劑時(shí)，溶劑對(duì)此輻射產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收，此時(shí)溶劑被看作是光學(xué)不透明的，會(huì)嚴(yán)重干擾組分的吸收測量。
對(duì)于示差折光檢測器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動(dòng)相，以達(dá)到zui高靈敏度。
液相色譜儀，看你分離的樣品的種類，看流動(dòng)相是否和樣品互溶，分離程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多種，看樣品的沸點(diǎn)，溶解性。
高效液相色譜儀分析中待測樣品的制備流程高效液相色譜儀分析樣品的種類繁多、物理形態(tài)廣泛、組成及其濃度復(fù)雜多變，對(duì)分析結(jié)果的干擾因素很多，為達(dá)到分析目的，樣品要進(jìn)行有效的制備。高效液相色譜儀分析樣品的制備包括預(yù)處理、提取、凈化和濃縮等過程。
一、預(yù)處理：
1、固體樣品：含水較低，粉碎過篩。含水量較高，取使用部分烘干后，粉碎過篩。
2、液體樣品：攪拌混合均勻。
3、特殊樣品：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行特殊處理。
二、提?。?/strong>
1、浸提法（固-液萃取法）：將樣品浸泡在溶劑中，把固體樣品中的某些組分浸出。
2、萃取法（液-液萃取法）：利用被提取組分在互不相溶的兩種溶劑中分配系數(shù)的不同實(shí)現(xiàn)分離。
三、凈化：
1、萃取法：適用于液體樣品，少量多次。
2、化學(xué)法：通過使雜質(zhì)或待測物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而改變其溶解性，使其與原體系分離。
3、層析法：利用混合物中各組分理化性質(zhì)的不同，使各組分在支持物上的移動(dòng)速度不同，而將各組分分離。
四、濃縮：
1、常壓濃縮：通過升高溫度，將溶劑由液態(tài)轉(zhuǎn)化成氣態(tài)被抽走，從而達(dá)到濃縮目的。適用于揮發(fā)性和沸點(diǎn)相對(duì)較低的樣品。
2、減壓濃縮：通過抽真空，使容器內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓，在不改變樣品化學(xué)性質(zhì)的前提下降低樣品的沸點(diǎn)，使一些高溫下化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定或沸點(diǎn)高的溶劑在低溫下由液態(tài)轉(zhuǎn)化成氣態(tài)被抽走，從而達(dá)到濃縮目的。
3、冷凍干燥：冷凍的同時(shí)抽真空減壓，使溶劑升華。適用于生物活性樣品。
4、氮吹儀濃縮：采用氮?dú)鈱?duì)加熱樣品進(jìn)行吹掃，使樣品迅速濃縮，達(dá)到快速分離純化的效果。適用于農(nóng)殘檢測和制藥行業(yè)等樣品的批量處理。
希望以上內(nèi)容對(duì)您有所幫助，如還有疑惑請(qǐng)致電廠家進(jìn)行咨詢。
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