分光光度計是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收的特性，以較純的單色光作為入射光，測定物質(zhì)對光的吸收，從而對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的儀器。在使用過程中常常會出現(xiàn)測量誤差，這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢？
1、復(fù)色光對比耳定律的偏離
比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光，但是精度再高的儀器，即使是雙單色器的分光光度計，也只能獲得近乎單色的光，無法獲得純單色光，它仍然含有狹窄光通帶，具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離。
固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調(diào)狹縫的可以做到0、1nm；可見分光光度計帶寬6nm、snm，甚至十幾納米。
光譜帶寬應(yīng)該是越小越好，但是，隨著光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低，所以，選擇儀器時要綜合考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時，可近似認(rèn)為符合比耳定律。
2、雜散光的影響
雜散光是指進(jìn)人檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分，它是光譜測量中誤差的主要來源。
產(chǎn)生原因有：
分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長處，由于單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著。
雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測量誤差，實際工作中，在定量分析時，一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度，如果在分析波長處含有雜散光，這時樣品的透光率較小，而雜散光大部分透過，使測量吸光度低于真實吸光度。
3、儀器噪聲對測t的影響
儀器噪聲也是儀器的一個重要指標(biāo)，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號，掃描100%T和0%T線，可觀察到分光光度計的絕對噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會掩蓋較小的測量信號，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。
4、波長和吸光度準(zhǔn)確度
樣品的每一個值都是在一定的波長下測得的，如果，波長誤差很大，測出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對儀器的直接要求，更應(yīng)引起足夠的重視。
國家計量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計透射比準(zhǔn)確度為A級士0、6%， B級土1、0%。
在原子吸收分光光度計的選擇上，我們首先要選定主要是用哪一種方法去做金屬元素的含量測定，然后根據(jù)測定方法去確定原子吸收分光光度計的配置。 如何了解我們需要使用的方法是什么呢？有以下幾點必須注意 ：
步驟一：首先有明白您需要檢測的元素種類是什么，原子吸收主要用來檢測的元素種類是微量/痕量金屬元素及很少種類的非金屬元素，搞明白了需要檢測的元素種類是什么之后就可以根據(jù)以下的原則來選擇型號了:
1、普通火焰法可以檢測的元素有 (即簡單的標(biāo)準(zhǔn)配置/單火焰型)： 鋰、鈉、鎂、鉀、鈣、鉻(gè) 錳、鐵、鈷、鎳(niè) 銅、鋅、鎵(jiā) 鍺(zhě) 砷(shēn) 硒(xī) 銣(rú) 鍶(sī)鉬(mù) 锝(dé) 釕(liǎo) 銠(lǎo) 鈀(bǎ) 銀、鎘(gé) 銦(yīn) 錫、銻(tī) 碲(dì) 銫(sè)鋨(é) 銥(yī) 鉑(bó) 金、鉈(tā) 鉛(qiān) 鉍(bì)
2、如果您除了以上元素還有其他元素可以對應(yīng)的選擇以下的附件：
a、氫化物發(fā)生器：用于檢測低熔點元素，砷(shēn) 硒(xī) 汞(gǒng)為必須使用。
b、富氧裝置：元素鈹(pí) 鋇(bèi) 為必須使用
c、石墨爐：石墨爐主要用于檢測高熔點元素和元素的痕量分析，必須使用石墨爐的元素（高熔點元素）： 鋁(lǚ) 硅(guī) 鈧(kàng) 鈦(tài) 釩(fán) 釔(yǐ) 鋯(gào) 鈮(ní) 鐠(pǔ) 釹(nǚ) 钷(pǒ) 釤(shān) 銪(yǒu) 釓(gá) 鋱(tè) 鏑(dī) 鈥(huǒ) 鉺(ěr) 銩(diū) 鐿(yì) 镥(lǔ) 釷(tǔ) 鈾(yóu) 鑭(lán) 鈰(shì) 鉿(hā) 鉭(tǎn) 鎢(wū)
步驟二：其次要搞明白您需要檢測的元素大約含量是多少，原子吸收主要用來檢測的元素種類是微量/痕量金屬元素及很少種類的非金屬元素，如果您的含量很高（數(shù)值達(dá)到常量）則建議選擇其他儀器，搞明白了需要檢測的元素種類大約含量是多少之后就可以根據(jù)以下的原則來選擇型號了。
a、如果您需要檢測的樣品的含量在PPM級別上，且不含高熔點元素，則選配標(biāo)準(zhǔn)配置/單火焰型即可。
b、如果您需要檢測的樣品的含量在PPB級別上，則需要選配帶石墨爐的型號，這里強調(diào)的一點是，除了砷(shēn) 硒(xī) 汞(gǒng)等個別的低熔點元素以外，其他的元素（也包含普通火焰法檢測的元素）也都可以用石墨爐來檢測；在實踐中石墨爐用來檢測高熔點元素，和其他的含量在PPB級別上的元素。
步驟三：如果您參照前2章選擇了普通火焰法的型號之后，您還要注意一個問題即您以后檢測元素擴(kuò)展的種類問題，如果您以后可能增加的元素種類都是普通火焰法可以檢測的，那么沒有什么問題，您以后只需買只需要檢測元素的空心陰極燈即可；如果您以后可能增加的元素種類都是需要用石墨爐法才可以檢測的，那么在您選擇型號的時候就需要考慮采購有石墨爐接口的設(shè)備，以備以后加配石墨爐系統(tǒng)可滿足要求。
分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。
操作方法：
接通電源，打開儀器開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱 10 分鐘。
將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時，需選用較高檔。
根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。
將空白液及測定液分別倒入比色杯 3/4 處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準(zhǔn)光路。
在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向 t=0 處。
蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的 t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。
比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。
三大注意事項：
分光光度計應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
分光光度計使用前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。
分光光度計在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。
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