分光光度計是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收的特性，以較純的單色光作為入射光，測定物質(zhì)對光的吸收，從而對物質(zhì)進行定性或定量分析的儀器，是基于物質(zhì)對光(對光的波長)的吸收具有選擇性，不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶，所以，當光色散后的光譜通過某一溶液時，其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下，溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關(guān)系，即符合比爾定律。
一、分光光度計日常使用注意事項
?、龠B續(xù)使用儀器的時間不應超過2小時，可以是間歇0.5小時后，再繼續(xù)使用。
?、诒壬竺看问褂猛戤吅?，要用去離子水洗凈并倒置晾干后，存放在比色皿盒內(nèi)。在日常使用中應注意保護比色皿的透光面，使其不受損壞或產(chǎn)生劃痕，以免影響透光率。
?、蹆x器不能受潮。在日常使用中，應經(jīng)常注意單色器上的防潮硅膠(在儀器的底部)是否變色，如硅膠的顏色已變紅，應立即取出烘干或更換。
④在托運或移動儀器時，應注意小心輕放。
二、分光光度計誤差主要是由4個原因?qū)е?/span>
1、復色光對比耳定律的偏離
比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光，但是精度再高的儀器，即使是雙單色器的分光光度計，也只能獲得近乎單色的光，無法獲得純單色光，它仍然含有狹窄光通帶，具有復色光的性質(zhì)。而復色光會導致比耳定律的正或負偏離。
固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調(diào)狹縫的可以做到0、1nm;可見分光光度計帶寬6nm、snm，甚至十幾納米。
光譜帶寬應該是越小越好，但是，隨著光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低，所以，選擇儀器時要綜合考慮各種條件的影響。當溶液濃度較小且單色光較純時，可近似認為符合比耳定律。
2、雜散光的影響
雜散光是指進人檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分，它是光譜測量中誤差的主要來源。
產(chǎn)生原因有：
分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長處，由于單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著。
雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴重的測量誤差，實際工作中，在定量分析時，一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度，如果在分析波長處含有雜散光，這時樣品的透光率較小，而雜散光大部分透過，使測量吸光度低于真實吸光度。
3、儀器噪聲對測t的影響
儀器噪聲也是儀器的一個重要指標，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號，掃描100%T和0%T線，可觀察到分光光度計的絕對噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會掩蓋較小的測量信號，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。
4、波長和吸光度準確度
樣品的每一個值都是在一定的波長下測得的，如果，波長誤差很大，測出的值肯定不準。吸光度準確度也是用戶對儀器的直接要求，更應引起足夠的重視。
三、超微量分光光度計對工作環(huán)境有7個要求
①儀器應安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5～35℃.相對濕度不超過85%。
?、趦x器應放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，且避免強烈的振動或持續(xù)的振動。
?、凼覂?nèi)照明不宜太強，且應避免直射日光的照射。
?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
⑤盡量遠離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設備。
?、薰┙o儀器的電源電壓為AC 220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強儀器的抗干擾性能。
?、弑苊庠谟辛蚧瘹涞雀g性氣體的場所使用。
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