色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合色譜及質(zhì)譜的技術(shù)，是目前分離和鑒定的重要的分析方法之一。
其中液相色譜-質(zhì)譜儀應(yīng)用更為廣泛，液相色譜除了能分析一般的化合物，還能分析氣相色譜不能分析的強(qiáng)極性、熱不穩(wěn)定性、難揮發(fā)的化合物。
液相色譜質(zhì)譜儀由色譜儀、接口、質(zhì)譜儀、電子系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)六大部分組成，是一種高端的檢測(cè)儀器，儀器的良好工作狀態(tài)是檢測(cè)準(zhǔn)確度的一個(gè)重要影響因子。
為了保證儀器有一個(gè)良好的狀態(tài)，保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性，需要正確合理的使用和維護(hù)儀器。
下面以質(zhì)譜儀為例，從儀器進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱系統(tǒng)、質(zhì)譜系統(tǒng)等各個(gè)系統(tǒng)的日常維護(hù)保養(yǎng)進(jìn)行詳細(xì)闡述；
并對(duì)使用過程中容易遇到的問題進(jìn)行分析，提出解決方法。
液相部分的維護(hù)
開機(jī)注意事項(xiàng)
要求使用220V單相交流電。如發(fā)生斷電，不管任何原因造成的，首先關(guān)閉儀器面板左下角的開關(guān)，等待供電恢復(fù)10分鐘以上再開啟電源，否則有可能燒毀電路板。
儀器運(yùn)行時(shí)需提供純度>99%的氮?dú)庾鳛閲婌F與干燥氣，輸出壓力為0.6～0.7MPa。
實(shí)驗(yàn)開始前先檢查液氮罐液體存量是否充足。
儀器開機(jī)時(shí)，確認(rèn)電源已經(jīng)連接而且氣振閥處于關(guān)閉，打開儀器總電源，隨后將前面板左下方的電源按鍵按下，真空泵即開始工作。
大約2～3分鐘后，儀器內(nèi)置的系統(tǒng)啟動(dòng)完畢，可以開啟Mass hunter軟件與儀器通訊。
等待四極桿溫度達(dá)到100℃，高真空達(dá)到4×10-5Torr之后，即可進(jìn)行調(diào)諧或開始實(shí)驗(yàn)。
在儀器開始抽真空時(shí)，請(qǐng)不要打開前級(jí)泵上的氣振閥，否則可能因?yàn)榛赜臀廴菊婵涨惑w內(nèi)部。
流動(dòng)相的要求
每次開機(jī)前，保證超純水和流動(dòng)相的新鮮，泵的各個(gè)管路不應(yīng)余留上次殘留的溶劑。
流動(dòng)相需符合HPLC與LC-MS要求等級(jí)，流動(dòng)相中盡量加易揮發(fā)的鹽，盡量不使用表面活性劑之類；
否則容易導(dǎo)致離子抑制，表面活性劑產(chǎn)生的加合物和離子簇會(huì)干擾質(zhì)譜數(shù)據(jù)。
如果遇到離子抑制，可以把樣品峰往后推或者改變提取方法，或者考慮用APCI源。
盡量不使用無揮發(fā)性的緩沖劑，例如，磷酸緩沖劑等，磷酸鹽及其他不揮發(fā)緩沖鹽在離子源會(huì)沉淀并堵塞毛細(xì)管等。
另外液質(zhì)不能承受過大流速。溶劑瓶避免陽光直射。
樣品的要求
保證樣品的清潔，進(jìn)樣前盡量使用0.22m的濾膜濾過，避免樣品太臟而堵塞色譜柱或離子源的毛細(xì)管;
樣品溶劑必須是色譜純，應(yīng)該和流動(dòng)相比例一致;進(jìn)樣濃度不宜太高，因?yàn)樘邼舛鹊臉悠啡菀孜廴眷`敏度高的儀器，進(jìn)而影響檢驗(yàn)結(jié)果。
由于液質(zhì)的流速較小(ESI一般為0.2mL/min)，所以配置樣品的溶劑強(qiáng)度不能太大；
盡量小于起始比例，否則，會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間偏移、峰形扭曲等問題。
進(jìn)樣系統(tǒng)的維護(hù)
對(duì)于液相色譜來說，無論是手動(dòng)進(jìn)樣還是自動(dòng)進(jìn)樣，都是使用六通閥進(jìn)樣的。
進(jìn)樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復(fù)性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小樣。
六通閥使用及維護(hù)注意事項(xiàng)：
①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45m濾膜過濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增；
甚至超過泵的限值壓力;再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。
通常可用水沖洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
注意：溶劑入口過濾芯為消耗品，尤其不可以使用超聲清洗，可以使用稀硝酸浸泡，然后用水沖洗至中性，以重復(fù)使用。
色譜柱系統(tǒng)的維護(hù)
在色譜操作過程中，需要注意下列問題：
①色譜柱的選擇會(huì)直接影響混合物中組分的分離，所以一定要選用合適的色譜柱，在使用新柱前要在自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來測(cè)定該色譜柱的柱效，并且在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。
②柱子在使用過程中，不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng);避免壓力和溫度的急劇變化，機(jī)械震動(dòng)和溫度的突然變化都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行。
③當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈，樣品前處理對(duì)于柱子使用壽命影響甚大，進(jìn)樣樣品要提純過濾并且嚴(yán)格控制進(jìn)樣量，可以使用保護(hù)柱。
④注意色譜柱的pH值使用范圍，不能高溫下過長時(shí)間使用硅膠鍵和相;每天分析工作結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?。若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉。
質(zhì)譜部分的維護(hù)
質(zhì)譜部分的維護(hù)一般可以按照以下日程進(jìn)行：
每天沖洗樣品通路、清潔噴霧式;每周檢查粗真空泵油的液面;更換粗真空泵油，檢查軟管、軟線和電纜；
清空排污瓶可以每半年進(jìn)行一次;另外在日常的試驗(yàn)中，根據(jù)試驗(yàn)需要清潔機(jī)殼，更換噴霧針，清潔或更換整個(gè)毛細(xì)管、分離器及透鏡。
重要的是每天沖洗系統(tǒng)和清潔噴霧室。毛細(xì)管和第一級(jí)錐孔要盡可能潔凈。
6個(gè)月更換機(jī)械泵油，需要時(shí)更換電子倍增器。
錐孔的清潔維護(hù)
定期清洗一級(jí)錐孔，一般兩周清洗一次，若進(jìn)樣數(shù)量較大，則盡量一周清洗一次，根據(jù)樣品數(shù)量多少及時(shí)清洗。
清洗時(shí)將離子源溫度降到室溫，注意關(guān)閉阻斷閥，旋開固定錐孔的兩個(gè)螺絲，取下錐孔滴甲酸數(shù)滴，浸潤幾分鐘，在甲醇：
水為50:50溶劑中超聲清洗15分鐘，切記：避免手觸碰到錐孔尖以免影響靈敏度。
長期進(jìn)行一級(jí)錐孔的清洗，可相應(yīng)減少較為復(fù)雜的二級(jí)錐孔、六級(jí)桿等的清洗，這些清洗相對(duì)復(fù)雜；
在進(jìn)行相關(guān)部件清洗時(shí)避免用棉花等擦拭關(guān)鍵部位，避免殘留的毛絨纖維干擾儀器的靈敏度。
粗真空泵的維護(hù)
真空泵包括需油的回轉(zhuǎn)泵及無油的渦旋泵，真空泵需注意觀察潤滑油是否出現(xiàn)渾濁或缺油的情況，及時(shí)更換潤滑油。
泵的油面宜在2/3處，泵長期運(yùn)作時(shí)每周需要擰開灰色震氣閥按鈕進(jìn)行半小時(shí)震氣，使油內(nèi)的雜物排出，油霧過濾器中的油放回到泵中；
然后再擰緊該旋鈕，如果發(fā)現(xiàn)油的顏色變深或液面降至1/2以下，需及時(shí)更換并保存更換記錄，注意專油專用;
無油渦旋泵，也需定期維護(hù)，一般半年到一年時(shí)更換葉端密封，每天需要震氣。
其他附屬設(shè)備維護(hù)
①每天實(shí)驗(yàn)完成之后，使用1:1異丙醇—水溶液清洗或擦洗離子源。注意清洗離子源時(shí)請(qǐng)勿將溶液噴入毛細(xì)管入口。
②當(dāng)電噴霧噴針被堵塞，針尖破損或觀察到偏離軸的噴射時(shí)，就需要更換或調(diào)整。
③檢查毛細(xì)管，鉑金涂層變透明時(shí)需要更換，注意檢查毛細(xì)管時(shí)需要放真空，毛細(xì)管兩端的鉑金涂層不能用砂紙打磨。
④數(shù)據(jù)系統(tǒng)，需定期備份硬盤數(shù)據(jù)，進(jìn)行歸類整理。定期重新啟動(dòng)機(jī)器，將內(nèi)存區(qū)域?qū)腴W存，保證數(shù)據(jù)系統(tǒng)的穩(wěn)定。
質(zhì)譜儀的校準(zhǔn)工作，一般宜6個(gè)月校準(zhǔn)一次。注意短時(shí)間內(nèi)溫度的急劇變化，其會(huì)影響質(zhì)量軸的偏離。
常見色譜故障
壓力過高
壓力過高的原因有很多，但總體來講就是一個(gè)原因，管路堵塞。
所以當(dāng)出現(xiàn)壓力高時(shí)候就要分段來檢查哪一段發(fā)生堵塞，檢查柱子進(jìn)口過濾芯是否被污染；
PURGE閥過濾芯是否被污染或色譜柱被污染，檢查管路，尤其是針座毛細(xì)管，檢查進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)密封閥或者進(jìn)樣針及針座有否堵塞。
壓力過低
壓力過低總體來講一個(gè)原因就是漏液問題，可能是管路泄露或者泵頭密封墊老化；
主動(dòng)閥、四元出口閥或單向出口閥失靈，另外還要考慮是否色譜柱失效造成固定相流失、溶劑或者流速的改變等因素。
注意壓力傳感器之前的某些部件地方堵塞也會(huì)造成壓力過低。
壓力波動(dòng)
液相泵的壓力波動(dòng)可以從ripple值看出，1200/1260一般ripple值小于2%。
如果液相泵的壓力不穩(wěn)定，會(huì)影響質(zhì)譜TIC基線的穩(wěn)定，并呈規(guī)律性變化。造成壓力波動(dòng)常見的原因就是泵內(nèi)有氣泡。
綜上所述，使用液相色譜-質(zhì)譜儀聯(lián)用儀器的工作人員，在熟練掌握儀器操作基礎(chǔ)上；
應(yīng)了解各個(gè)組成部分的性能，在日常使用中累積經(jīng)驗(yàn)，從小處著手做好日常維護(hù)保養(yǎng)工作。
如此，才能保證儀器的良好狀態(tài)，很大程度降低使用維護(hù)成本；
確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性，并能降低儀器耗損率，延長使用壽命。
液相色譜儀的應(yīng)用，可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來說，沸點(diǎn)在450℃以下，相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%～20%，其余的80%～85%有機(jī)物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護(hù)，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
反沖色譜柱，一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效，預(yù)柱和保護(hù)柱，選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)，由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理，利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料：經(jīng)過制備處理后，用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒，通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管：內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm，長250mm。
色譜柱：也稱固定相，是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的，色譜柱的填充，干法填充：在硬臺(tái)面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺(tái)面墩10-20次。
濕法填充：又稱淤漿填充法，使用專門的填充裝置。
液相色譜儀在高效使用中需注意以下幾個(gè)問題：
1、色譜柱中的流動(dòng)相是否會(huì)會(huì)排干的問題：
不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過這樣的情形：不慎未及時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會(huì)損壞色譜柱?泵是否已將色譜柱中所有流動(dòng)相都排干了?色譜柱還能使用嗎?事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì)造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會(huì)將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。
2、色譜柱變干的問題：
另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑(如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇)沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面;已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要(以1mL/min的流速)沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。
3、使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接頭需要注意以下問題：
如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會(huì)非常方便。PEEK管路容易連接;PEEK接頭不僅無需工具，手?jǐn)Q即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。
使用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對(duì)鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會(huì)變脆。另一個(gè)西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi(但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會(huì)超過3000psi)。
使用PEEK接頭時(shí)則無需擔(dān)心接頭耐溶劑性能，因?yàn)榻宇^幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手?jǐn)Q固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時(shí)，可能會(huì)使接頭在管路上滑動(dòng)而產(chǎn)生死體積或漏液。
4、預(yù)防液相泵的故障：
處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn);保留時(shí)間的重復(fù)性好。在等度洗脫時(shí)壓力波動(dòng)小于2%。梯度洗脫時(shí)壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。 要保持泵的良好操作性能,必須維護(hù)系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過濾和脫氣.下面列出預(yù)防泵故障的幾項(xiàng)措施：
1)用高質(zhì)量試劑和HPLC級(jí)溶劑;
2)過濾流動(dòng)相和溶劑;
3)脫氣;
4)每天開始使用時(shí)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液;
5)不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中;
6)定期更換墊圈;
7)需要時(shí)加潤滑油;
8)查閱有關(guān)泵操作手冊(cè)中的其它建議。
9)為了使故障發(fā)生后盡快排除，平時(shí)應(yīng)常備密封、單向閥(入口與出口)、泵頭裝置、各式接頭、保險(xiǎn)絲等部件，以及更換工具。
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