二氧化碳培養(yǎng)箱是通過(guò)在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類(lèi)似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境,培養(yǎng)箱要求穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對(duì)飽和濕度(95%),來(lái)對(duì)細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置。
二氧化碳培養(yǎng)箱的日常清潔:
1、清洗培養(yǎng)箱外壁,以消除可能進(jìn)入的污垢和微生物。如果培養(yǎng)箱的頂部非常臟,當(dāng)打開(kāi)培養(yǎng)箱門(mén)灰塵很可能進(jìn)入,所以清潔頂部是很重要的。用無(wú)絨布蘸溫和的肥皂水。然后用干凈的布蘸清水擦拭干凈。用干凈的干布擦干外面。特別要注意每個(gè)人都接觸的門(mén)把手。不要使用任何液體或噴霧清潔劑清潔觸摸屏顯示器。而需要使用干的超細(xì)纖維布來(lái)清潔這些。
2、如果選配的培養(yǎng)箱具備自動(dòng)消毒功能,請(qǐng)立即運(yùn)行。在周期完成之后,用無(wú)菌蒸餾水填充儲(chǔ)水器,并打開(kāi)氣閥。
3、加熱培養(yǎng)箱,讓培養(yǎng)箱完全干燥。這應(yīng)該只需要花一點(diǎn)時(shí)間,所以不要讓門(mén)開(kāi)著——那只會(huì)重新引入新的灰塵和污物!
4、用稀釋的季銨鹽消毒劑擦拭內(nèi)壁和部件。用70%酒精擦拭以除去任何剩余的消毒劑痕跡。再次強(qiáng)調(diào),一定要擦到所有的角落,并記得安好門(mén)封條,更換內(nèi)部零件。
5、用蒸餾水沖洗箱體內(nèi)壁和部件,并用干凈的無(wú)絨布再一次擦干。
6、取出所有隔板,隔板支架,以及所有附件、空氣管道。清空水盤(pán)并用干凈的無(wú)絨布擦干。
7、取出培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)物。如果清洗時(shí)間不長(zhǎng),可以將其保存在干凈,無(wú)菌的容器中,保持其溫度。關(guān)閉培養(yǎng)箱,包括關(guān)閉供氣閥。
水套式二氧化碳培養(yǎng)箱是在普通培養(yǎng)的基礎(chǔ)上加以改進(jìn),主要是能加入CO2,以滿(mǎn)足培養(yǎng)微生物所需的環(huán)境。主要用于組織培養(yǎng)和一些特殊微生物的培養(yǎng)。
水套式二氧化碳培養(yǎng)箱廣泛應(yīng)用于細(xì)胞、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng),常見(jiàn)于細(xì)胞動(dòng)力學(xué)研究、哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌物的收集、各種物理、化學(xué)因素的致癌或毒理效應(yīng)、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)抗體、體外授精(IVF)、干細(xì)胞、組織工程、藥物篩選等研究領(lǐng)域。
對(duì)于細(xì)胞來(lái)說(shuō),非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存,培養(yǎng)箱本身是不會(huì)辨別的,而細(xì)胞培養(yǎng)中大部分時(shí)間里細(xì)胞都是位于培養(yǎng)箱內(nèi),因此箱體內(nèi)能否抑菌或滅菌非常關(guān)鍵。
水套式二氧化碳培養(yǎng)箱中的主要污染源:細(xì)菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原體、非同種細(xì)胞。
支原體:支原體污染后,因?yàn)樗鼈儾粫?huì)使細(xì)胞死亡可以與細(xì)胞長(zhǎng)期共存,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,細(xì)胞無(wú)明顯變化,外觀上給人以正常感覺(jué),實(shí)則細(xì)胞已經(jīng)受到多方面潛在影響,如引起細(xì)胞變形,影響DNA合成,抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等,往往被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)者忽視。
細(xì)菌:細(xì)菌污染后,培養(yǎng)基1-2天就會(huì)變色,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯,應(yīng)迅速將污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離,滅菌后丟棄,還要用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)。
病毒:由于病毒寄生生存,爆發(fā)后盡快和正常細(xì)胞隔離,丟棄處理,相對(duì)來(lái)說(shuō)容易處理,對(duì)操作者威脅較大;盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
真菌(霉菌和酵母菌):真菌生長(zhǎng)的比較慢,不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了;目前沒(méi)有好的抑制方法,包括現(xiàn)在常用的兩性霉素,一旦污染容易反復(fù)爆發(fā),尤其孢子很難殺滅。
非同種細(xì)胞:即細(xì)胞交叉污染,由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴(yán)格分開(kāi),往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。
目前,世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染,致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。
水套式二氧化碳培養(yǎng)箱是通過(guò)在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類(lèi)似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境如穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對(duì)濕度(95%),來(lái)對(duì)細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置。
在生物活體內(nèi),生物體有自身的免疫系統(tǒng)保護(hù)細(xì)胞或組織,但是在體外培養(yǎng)時(shí),沒(méi)有任何保護(hù)自己的免疫屏障。對(duì)于二氧化碳培養(yǎng)箱的基本參數(shù)溫度、CO2和濕度,大多數(shù)培養(yǎng)箱都能滿(mǎn)足研究實(shí)驗(yàn)的需要。
然而,針對(duì)培養(yǎng)過(guò)程中面臨的各種污染源,各品牌水套式二氧化碳培養(yǎng)箱的控制方式和效果不盡相同,因此細(xì)胞體外培養(yǎng)中最大的威脅實(shí)際上是污染問(wèn)題。
二氧化碳培養(yǎng)箱是一種用于細(xì)胞組織,細(xì)菌培養(yǎng)的生化實(shí)驗(yàn)儀器。是開(kāi)展免疫學(xué)、遺傳學(xué)及生物工程研究的必備產(chǎn)品。適用于生命科學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、藥物學(xué)、醫(yī)藥工業(yè)、食品工業(yè)、毒理學(xué)、基礎(chǔ)生物學(xué)研究和早期臨床醫(yī)學(xué)研究。
二氧化碳培養(yǎng)箱使用注意事項(xiàng):
(1) 培養(yǎng)箱應(yīng)由專(zhuān)人負(fù)責(zé)管理,操作盤(pán)上的任何開(kāi)關(guān)和調(diào)節(jié)旋扭一旦固定后,不要隨意扭動(dòng),以免影響箱內(nèi)溫度,co2、濕度的波動(dòng),同時(shí)降低機(jī)器的靈敏度。
(2) 定期檢查超溫安全裝置,以防超溫。方法為按進(jìn)監(jiān)測(cè)報(bào)警按扭,轉(zhuǎn)動(dòng)固定螺絲,直到超溫報(bào)警裝置響,然后關(guān)閉超溫安全燈。
(3) 所加入的水必須是蒸餾水或無(wú)離子水,防止礦物質(zhì)儲(chǔ)積在水箱內(nèi)產(chǎn)生腐蝕作用。每年必須換一次水。經(jīng)常檢查箱內(nèi)水是否夠。
(4) 如長(zhǎng)期不使用二氧化碳時(shí),應(yīng)將co2開(kāi)關(guān)關(guān)閉,防止co2調(diào)節(jié)器失靈。
(5) 所使用的co2必須的純凈的,否則降低co2傳感器的靈敏度和污染co2過(guò)濾裝置。
(6) 在無(wú)濕度控制的培養(yǎng)箱內(nèi),為保持箱內(nèi)co2 的穩(wěn)定,要在箱內(nèi)底層放入一個(gè)盛水的容器。
(7) 箱內(nèi)應(yīng)定期用消毒液擦洗消毒,擱板可取出清洗消毒,防止其它微生物污染,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。