高效液相色譜以它定量分析結(jié)果準(zhǔn)確、分析周期短、分析范圍廣及分析檢測限低等優(yōu)勢，在食品添加劑、藥物成分分析等多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。
本文就液相色譜儀在實際操作時應(yīng)注意的事項及維護做了簡單介紹。
主要部件介紹
輸液系統(tǒng)
輸液系統(tǒng)主要包括在線脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置。在線脫氣裝置主要功能是流動相在進入柱子前排除氣泡。高效液相色譜柱的填料顆粒小，通過2~5mm的色譜柱受到的流動阻力很大，因此需要通過高壓輸液泵抽取流動相輸送至色譜柱。
高壓泵按輸液性能可分為恒壓、恒流泵。按機械結(jié)構(gòu)可分為：液壓隔膜泵、氣動放大泵、螺旋注射泵和往復(fù)柱塞泵。
進樣器
進樣器是將分析樣品送入色譜柱的裝置，分為手動、自動進樣器兩種。手動進樣器一般配有20~100μL的定量環(huán)。
色譜柱
色譜柱以液體為流動相，以廣義的固相為固定相來進行分析樣品的分離工作。
色譜柱按照分離模式大致可以分為正相色譜柱和反相色譜柱。
檢測器
檢測器是將色譜柱分離出樣品的物理或化學(xué)特性轉(zhuǎn)換為可以測量的電信號，通過色譜圖記錄下來，由色譜圖中的峰形狀判斷分離效果，依據(jù)標(biāo)物、分析樣色譜圖的出峰時間、峰面積分別對樣品進行定性定量分析。
維護及使用注意事項
1.開關(guān)機操作注意
分析準(zhǔn)備工作做好后，依次打開穩(wěn)壓電源、高壓輸液泵、柱溫箱、檢測器，待各部件自檢結(jié)束，打開連接儀器的電腦，啟動工作軟件。分析工作結(jié)束后，關(guān)閉工作軟件，再依次關(guān)閉檢測器、柱溫箱和高壓輸液泵。
2.對流動相的要求
為保證液相色譜儀器的正常使用，所有流動相必須是色譜級的，且經(jīng)過過濾雜質(zhì)、排除氣泡后裝入干凈的流動相貯存瓶中待用。
(1)流動相的物理化學(xué)性能要求
對分析物要有足夠的溶解能力，以利于提高檢驗的靈敏度;流動相的黏度要小，以保證合適的柱降壓;流動相的沸點要低，以利于制備分離時樣品的回收;流動相的PH值一般應(yīng)在2~7.5;使用期限不得超過2天，否則產(chǎn)生細菌污染管路。
(2)流動相的過濾
流動相在使用前都必須經(jīng)過濾，以除去雜質(zhì)微粒。同時要定期清洗吸濾頭，以防雜質(zhì)通過其進入流動相。應(yīng)依據(jù)其是否是水溶性選擇水膜或有機膜(0.45μm或0.22μm)，使用溶劑過濾裝置，通過真空泵抽氣過濾。
(3)流動相的脫氣
流動相必須預(yù)先脫氣，否則易產(chǎn)生氣泡，影響泵的工作。此外，溶解在流動相中的氧能與某些有機溶劑形成有紫外吸收的絡(luò)合物，提高背景吸收，會在梯度洗脫時造成基線漂移或形成鬼峰。
常有的脫氣方法有在線真空脫氣法、超聲波脫氣法、抽真空脫氣法三種。
3.色譜柱的維護及使用注意事項
所有分析樣品zui好把pH值調(diào)節(jié)到適合色譜柱的pH值范圍內(nèi)。進樣要避免超負(fù)荷，這是保持色譜柱性能持久良好的重要方法之一。
手動進樣器進樣的話，進樣時動作要快速準(zhǔn)確。分析物成分復(fù)雜時，要在色譜柱前加色譜保護柱以保護色譜柱。
每次分析工作開始時，要對色譜柱進行平衡，用含10%流動相中的有機溶劑的水溶液進行排氣和沖洗色譜柱和管路，沖洗30分鐘左右，將色譜柱中的純有機溶劑替換掉，然后再用至少10倍柱體積的流動相平衡色譜柱，直至基線平衡后方可進樣。
每次分析工作結(jié)束后，一定要立即用一定量的水溶液徹底沖洗色譜柱中的緩沖鹽液，再用對被測物洗脫能力強的溶劑來沖洗色譜柱，沖洗時間不能小于1小時，洗脫溶劑的用量至少為柱體積的20倍。
若不及時沖洗色譜柱，雜質(zhì)長時間積累在其中，易堵塞色譜柱，降低柱效性能。
長期這樣，會加速減少色譜柱使用壽命。色譜柱4天以上不使用，應(yīng)從儀器上取下，用封頭螺帽把兩頭緊緊密封。色譜柱保存時注意不要強烈震動、碰撞。
4.高壓輸液泵的維護及使用注意事項
每次分析工作結(jié)束后，都應(yīng)及時清洗泵。當(dāng)有緩沖鹽做流動相時，緩沖鹽與有機溶劑互相交換前一定要用5%的甲醇水溶液清洗泵，防止鹽在有機相中結(jié)晶損壞泵中各組件。
緩沖鹽溶液的濃度不要過高，要控制在5%以下，否則高濃度的緩沖鹽會磨損密封墊和活塞，降低其使用壽命。長時間使用高濃度的緩沖鹽，必須用10%的異丙醇色譜級溶液清洗泵，從而保護柱塞和密封墊。
輸液泵工作前要設(shè)置工作壓力范圍，正常工作壓力一般不要超過30Mpa，否則經(jīng)常高壓會使密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。平時分析工作要養(yǎng)成記錄壓力的好習(xí)慣，這樣如果工作壓力超過平時正常壓力的10%~15%，就應(yīng)及時查找原因。
5.紫外檢測器的維護及使用注意事項
紫外檢測器有一定的使用壽命，所以平時應(yīng)盡量減少氘燈的使用時間，在柱平衡進行一大半之后，在走基線之前，打開檢測器光源;分析結(jié)束后即可關(guān)閉檢測器光源。
要保持檢測器四周環(huán)境清潔，實驗室盡量少開窗戶，定期地面進行吸塵工作，防止檢測器工作時由于靜電吸附灰塵顆粒覆蓋在光學(xué)元件上。
檢測器池內(nèi)存在氣泡就會產(chǎn)生噪音，噪音會干擾定量分析，所以流動相須充分脫氣后再使用。
應(yīng)定期清洗流通池。如觀察到流通池內(nèi)部無氣泡或臟物，應(yīng)清洗流通池。通過注射器用異丙醇等有機溶劑沖洗池內(nèi)，以清洗透鏡。如是含有緩沖鹽的溶劑作流動相，應(yīng)在使用異丙醇沖洗前用水替換池中原先有的溶劑。
高效液相色譜儀是實驗中常見的儀器之一，色譜柱的靈敏度是確保實驗準(zhǔn)確性的重要原因，那么當(dāng)色譜柱的靈敏度不夠時，我們該如何去解決呢？應(yīng)該從以下幾個方面去分析：
1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子
3、樣品與檢測器不匹配：根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器
4、檢測器衰減太多：調(diào)整衰減即可。
5、檢測器時間常數(shù)太大：解決辦法為降低時間參數(shù)
6、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。
7、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。
8、記錄儀測壓范圍不當(dāng)：調(diào)整電壓范圍即可。
9、流動相流量不合適：調(diào)整流速即可。
10、檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫，也可以拓展為制備系統(tǒng)，采用高壓混合器連接兩個高壓恒流泵，利用RS232通訊，即可實現(xiàn)梯度分析；
便于用戶自由選擇與搭配，混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構(gòu)成，用途廣泛；
可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。
高效液相色譜儀分離原理：液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。
流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。
當(dāng)試樣進入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進行分配。達到平衡時，高效液相色譜儀報價，服從于高效液相色譜計算公式；
6種定量計算方法：歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法，高效液相色譜儀適用范圍，以及指數(shù)計算法。
高效液相色譜儀特點：
1、梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，編輯、存貯60個梯度方法，運行復(fù)雜的梯度程序；
2、泵形式：串聯(lián)雙柱塞 浮動式密封圈；泵頭自沖洗功能，泵無須手動排空即可輸液“自吸式單向閥”技術(shù)，可延長密封圈使用壽命；
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結(jié)構(gòu)和獨特的散熱技術(shù)，高效的光學(xué)系統(tǒng)和數(shù)字過濾；
4、程序化的溶劑類和壓縮因子，可自動補償；完整的預(yù)清洗功能，更于快速溶劑更換；
5、波長調(diào)節(jié)功能：既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設(shè)定，全封閉集成型光電檢測元件，無需任何機械部分調(diào)整即可選擇或改變波長；
6、光源運行時間在線監(jiān)測并顯示，方便用戶確定光源壽命；
7、三條流量校正曲線以及特有的多點參數(shù)校正，保障了極高的流量準(zhǔn)確性；
8、梯度：高壓2-3元；梯度方式：高壓，梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，可通過PC機及泵控制；
9、實時顯示樣品池和參比池能量，方便判斷光源和流通池狀態(tài)；
10、紫外檢測器具有自動波長定位調(diào)整，自動調(diào)零，多量程輸出選擇；
11、智能化高，可實現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)化平臺監(jiān)控，提高了你的QC效益；
12、自動化，讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時間。
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