液相色譜儀的日常維護與注意事項
一、日常維護：
1.定期清洗單向閥：將單向閥卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲，10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。
2.定期清洗吸濾頭：將吸濾頭卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。
3.定期沖洗檢測池：把色譜柱卸下，在流速1.0ml/min的狀態(tài)下先用純凈水沖洗30分鐘，然后再用30%
磷酸（色譜級）沖洗30分鐘左右，再用超純水沖洗至流出液為中性，最后用甲醇沖洗，待用。
二、注意事項：
1.開始進樣前30分鐘開氘燈即可，節(jié)約燈的能量和使用時間。
2.流動相的使用和注意事項：
?、偎昧鲃酉啾仨氼A先濾過和脫氣，流動相一般貯存于玻璃不銹鋼容器內(nèi)。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應盡量新鮮配制使用，不要長期貯存。容器應定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。
?、谂渲屏鲃酉嘤盟铻橥薰萍儍羲蚪?jīng)超聲過濾后的純化水，流動相配制好后先用直徑為5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜，通過沙芯過濾器的過濾，然后在超聲儀上超聲。
③不得將裝流動相的容器直接放置與超聲儀內(nèi)，需放與篩網(wǎng)上進行超聲。
3.六通閥的使用和維護注意事項：
?、贅悠啡芤哼M樣前必須用濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
?、谵D(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
?、蹫榉乐咕彌_鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結(jié)束后應沖洗進樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
4.色譜柱柱壓升高的主要因素：
?、貺C-10AT/20AT/10ATPlus泵的單向閥堵塞。
?、谏V柱的入口篩板堵塞。
?、畚鼮V頭堵塞。
?、躊EEK管接口處堵塞。
5.色譜柱柱壓不穩(wěn)的因素：
?、俦脙?nèi)有空氣。
②泵密封墊損壞。
?、廴軇┲械臍馀?。
?、芟到y(tǒng)檢漏，找出漏點。
6.樣品峰保留時間漂移的主要因素：
?、偈覂?nèi)溫度變化過大。
?、诹鲃酉喑煞职l(fā)生變化。
③色譜柱未平衡好。
?、鼙弥杏袣馀荨?/p>
?、菰摿鲃酉嗍欠襁m宜此樣品的檢測。
7.基線漂移的主要因素：
?、僦鶞夭▌印?/p>
?、诹鲃酉嗖痪鶆颉?/p>
?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。
?、軝z測器出口阻塞。
?、萘鲃酉嗯浔炔划敾蛄魉僮兓?/p>
?、蘖鲃酉辔廴尽⒆冑|(zhì)。
?、呤褂醚h(huán)溶劑。
8.檢測器靈敏度不夠的主要因素：
?、贅悠愤M樣量不足。
?、诓ㄩL設(shè)置不正確。
?、蹤z測器池窗污染。
?、軝z測池中有氣泡。
?、蓦妷翰环€(wěn)。
?、蘖鲃酉嗔魉俨缓线m。
9.色譜柱的使用和維護注意事項：
?、俦苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓叭魏螜C械震動。柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
?、趹饾u改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>
?、垡话阏f來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
?、苓x擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
?、荼苊鈱碗s的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。
⑥經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。
?、弑４嫔V柱時應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至次日或更長時間。
⑧色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是濾片被堵塞，這時應更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗；另一種可能是大分子進入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
?、嵋怨枘z為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。每次分析檢測完成后，可以用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。
10.樣品必須用直徑為2.5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜針式過濾。如有明確要求需用離心過濾的，經(jīng)離心過濾后取上清液即可。
色譜柱是高效液相色譜儀主要的部件，被測物質(zhì)能否被很好的分離和測定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長色譜柱的使用壽命。
1、使用預柱和保護柱
預柱(pre-column)安裝于泵和進樣器之間，它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡，并防止了對柱填料有破壞作用的組分或污染物進入色譜柱。保護柱(guardcolumn)可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進入色譜柱，保護柱應與色譜柱的填料相同。預柱和保護柱可以經(jīng)常更換，而不需要經(jīng)常更換色譜柱，這就延長了色譜柱的使用壽命。
2、防止氣體進入
有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進入的，否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此，為了防止氣泡進入色譜柱，一定要使用經(jīng)過脫氣的流動相，并且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱。a、拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b、如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進入；c、如無溶劑滲出時，表明色譜柱的此端已經(jīng)進去空氣了，此時，可將色譜柱的出口端接到進樣閥上，以流動相來反方向沖洗色譜柱，以便將柱內(nèi)的空氣排除。可以以0、2ml/min的小流量來沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低；d、如果流出的溶劑里不含有氣泡，說明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱里面了。
3、清洗
為了不使被測物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之后，都應及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì)，此時應用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液，則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內(nèi)的鹽，然后再用合適的溶劑來沖洗。
凝膠濾過色譜法(GelFiltrationChromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動相，用完之后當然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續(xù)操作，可以將緩沖溶液置于柱內(nèi)過夜，但可以是維持小流速(＜0、5ml/min)以防止緩沖鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈，以防止它們對柱體的腐蝕。
4、存放
如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點：
a、幾天之內(nèi)的短期放置，應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
b、如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱則可用正已烷或庚烷，而凝膠柱則不能用水了，因柱內(nèi)如果有微生物的生長則會使柱效降低，此時應用0、05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴。色譜柱長期放置時，一定要將色譜柱的兩端封嚴，以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象，因這可導致柱效的嚴重降低。
c、色譜柱應貯存在室溫下，如果放置于0℃以下的環(huán)境里，柱內(nèi)就會結(jié)冰，這也將導致柱效的降低。
液相色譜儀的應用，可用于高沸點、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來說，沸點在450℃以下，相對分子質(zhì)量小于450的有機物可用液相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機物的15%～20%，其余的80%～85%有機物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護，色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
反沖色譜柱，一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效，預柱和保護柱，選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)，由輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理，利用混合物各組分在固定相和流動相中溶解、分配或吸附等化學作用性能的差異，使各組分在作相對運動的兩相中反復多次受到上述各作用力而達到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料：經(jīng)過制備處理后，用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒，通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管：內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm，長250mm。
色譜柱：也稱固定相，是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的，色譜柱的填充，干法填充：在硬臺面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺面墩10-20次。
濕法填充：又稱淤漿填充法，使用專門的填充裝置。
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