1、液相色譜儀的日常操作條件：溫度：10-40℃；相對濕度<80％；可以是恒溫、恒濕，遠離高電干擾、高振動設(shè)備。
2、泵的保養(yǎng)：
（1）使用流動相盡量要清潔；
?。?）進液處的沙芯過濾頭要經(jīng)常清洗；
?。?）流動相交換時要防止結(jié)晶；
（4）避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡;
3、檢測器(UV)的保養(yǎng)：
?。?）紫外燈的保養(yǎng)：在2小時以上不用是關(guān)閉，節(jié)省能量。
?。?）樣品池要沖洗、保養(yǎng)。
4．進樣器的保養(yǎng)：
?。?）每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進樣口，防止樣品的交叉污染；
?。?）平時應(yīng)注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染，一般須申請維修或更換配件。
5、色譜柱的保養(yǎng)：
?。?）色譜柱在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動；
?。?）當(dāng)色譜柱和色譜儀聯(lián)結(jié)時，閥件或管路一定要清洗干凈；
?。?）要注意流動相的脫氣、PH；
?。?）避免使用高粘度的溶劑作為流動相；
?。?）進樣樣品要提純；
（6）嚴(yán)格控制進樣量；
?。?）每天分析工作結(jié)束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品；
?。?）每天分析測定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?/p>
（9）若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機溶劑保存并封閉；
6、工作站：出現(xiàn)死機可重起計算機；不正常運行時，首先可更換電腦測試其硬件故障；或在本機上重新插拔接口、重新安裝軟件。
7、流動相的抽作要求：二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾；流動相脫氣至關(guān)重要（可采用抽濾，超聲波脫氣等方法）。緩沖鹽的使用：流動相含有鹽分時，做完實驗后一定要進行流路沖洗；首先用水沖洗，打開排液閥用PURG鍵轉(zhuǎn)換出原有含鹽的流動相，然后關(guān)閉排液閥打開泵沖洗全部流路45分鐘以上，如此更換流動相為水和甲醇混合液沖洗全部流路30分鐘（此步驟一般可省去，根據(jù)實驗而論），最后更換純甲醇沖洗全部流路45分鐘以上。
8、吸濾頭：特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要換。
9、過濾器：當(dāng)色譜峰出現(xiàn)異常情況時，有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
10、單向閥：如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取，則可能是單向閥出現(xiàn)問題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時須按其安裝的方向放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！
11、泵頭：泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修（如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等）
12、排液閥：此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)；
在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
液相色譜儀系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi);
由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程;
各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀。
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。
隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題zui有前途的方法。
由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域。
液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。
液相色譜儀分離的目的必須十分明確，下面的問題在建立方法之初就應(yīng)確定：
（1）主要目的是什么？定量或定性，還是定性、定量同時做？；
?。?）是否有必要解析出樣品的所有成分？譬如可能有必要分離出產(chǎn)品中的所有降解物或雜質(zhì)，以使含量測定結(jié)果更加可靠，但卻沒必要將它們彼此完全分開。
?。?）如要求定量分析，準(zhǔn)確度與精密度需多大？樣品主要成分的精密度通常能達到±1—2%，特別是不需樣品預(yù)處理的情況。
?。?）特殊化合物可能會以不同的樣品形式出現(xiàn)（如：原料藥，一種或多種形態(tài)，環(huán)保樣品等）。是否需要一種以上的HPLC方法？單一方法分離不同形態(tài)樣品是否理想？
?。?）一次將分析多少樣品？當(dāng)必須同時處理大量樣品時，運行時間將變得非常重要。
有時甚至為了縮短運行時間而以犧牲樣品分離度作代價，如縮短柱長或加快流速。當(dāng)一次分析的樣品數(shù)目超過10個，運行時間一般應(yīng)控制在20min以內(nèi)。
?。?）將要使用該方法的實驗室中，有哪些HPLC設(shè)備？色譜柱能否恒溫系統(tǒng)能否做梯度洗脫？該方法是否可在不同設(shè)計與生產(chǎn)的設(shè)備上運行？
方法建立實驗開始之前，應(yīng)明確對方法的這些要求。
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