分光光度法是根據(jù)被測(cè)物質(zhì)分子對(duì)紫外、可見(jiàn)波段范圍單色輻射的吸收或反射強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行物質(zhì)的定性、定量或結(jié)構(gòu)分析的一種方法。
可見(jiàn)分光光度計(jì)的維護(hù)：
1、保護(hù)光源：光源燈有一定的壽命，儀器不工作時(shí)不要開(kāi)燈，若工作間歇時(shí)間短，可不關(guān)燈。 一旦停機(jī)，則要待燈冷卻后再重新啟動(dòng)，并預(yù)熱15min。
燈泡發(fā)黑或亮度明顯減弱或不穩(wěn)定時(shí)，就及時(shí)更換。 經(jīng)經(jīng)紫外光照射后形成結(jié)痕可用無(wú)水乙醇去除。
2、保證合適的工作環(huán)境溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。
不適宜的溫度和濕度可引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降；造成光柵、反射鏡、聚焦鏡等光學(xué)部件的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等；甚至使儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正溫度和濕度。
3、定期清潔，保障環(huán)境和儀器內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
儀器使用一定時(shí)間后，內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃，可以由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開(kāi)啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑，最后恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校和記錄。
4、正確使用比色皿拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
清洗比色皿時(shí)，先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。若被比色皿被有機(jī)物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液（1:2）浸泡片刻，再用水沖洗。
每次做完實(shí)驗(yàn)應(yīng)立即洗凈比色皿。比色皿外壁的水用擦鏡紙或細(xì)軟的吸水紙吸干，以保護(hù)透光面。
可見(jiàn)分光光度計(jì)是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、使用方便的單光束分光光度計(jì)，基于樣品對(duì)單色光的選擇吸收特性可用于對(duì)樣品進(jìn)行定性和定量分析。
廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢測(cè)、生物化學(xué)、石油化工、環(huán)保監(jiān)測(cè)、食品生產(chǎn)和質(zhì)量控制等部門(mén)作定性、定量分析，還可作為大、專(zhuān)院校和中學(xué)相關(guān)課程的教學(xué)演示和實(shí)驗(yàn)儀器。
紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同；
因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。
若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒(méi)有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測(cè)定條件要相同。
實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。
應(yīng)用：
在水和廢水監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用，對(duì)于一個(gè)水系的監(jiān)測(cè)分析和綜合評(píng)價(jià)，一般包括水相(溶液本身)、固相(懸浮物、底質(zhì))、生物相(水生生物)。
在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測(cè)中，紫外可見(jiàn)分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復(fù)雜多變，待測(cè)物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時(shí)必須選擇好分析方法。
在農(nóng)產(chǎn)品和食品分析中可用于檢測(cè)的組分或成分有蛋白質(zhì)、賴(lài)氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等；
在植物生化分析中可用于檢測(cè)葉綠素、全氮和酶的活力等；
在飼料分析中可用于檢測(cè)煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。
在紫外分光光度計(jì)的測(cè)試指標(biāo)中準(zhǔn)確度是至關(guān)重要的，只有保證了準(zhǔn)確度才能保證樣品數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和真實(shí)性。
影響紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)準(zhǔn)確度的因素有：
?。?）波長(zhǎng)準(zhǔn)確度。波長(zhǎng)準(zhǔn)確度在確保紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的準(zhǔn)確度中起著十分重要的作用。因?yàn)闇y(cè)試樣品物質(zhì)不同，那么它對(duì)不同波長(zhǎng)的光有著不同的摩爾吸光系數(shù)。由朗伯比爾定律可知，不同的摩爾吸光系數(shù)所對(duì)應(yīng)的吸光度會(huì)有差異，由此就會(huì)產(chǎn)生不一致的分析誤差。
（2）雜散光。雜散光是準(zhǔn)確度分析誤差的一個(gè)重要來(lái)源，直接影響著樣品物質(zhì)在測(cè)試時(shí)所能配制的最大濃度。有研究結(jié)果表明，越高濃度的測(cè)試樣品雜散光的影響越大，如果是在一個(gè)比較大的濃度下，雜散光增強(qiáng)，吸光度和濃度成比例的范圍縮小。
?。?）噪聲。影響紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度的噪聲包括光噪聲和電噪聲。其中光噪聲是由光源產(chǎn)生的，具體來(lái)說(shuō)就是光源的發(fā)光強(qiáng)度分布因子導(dǎo)致光噪聲的出現(xiàn)。電噪聲的來(lái)源是光電倍增管、各種電源以及放大器等。作為紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度最關(guān)鍵的技術(shù)參數(shù)之一，噪聲是分析測(cè)試中主要誤差源頭，它是影響紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度檢測(cè)下限的因素。
（4）基線(xiàn)平直度?；€(xiàn)平直度是全波段內(nèi)每個(gè)波長(zhǎng)上的噪聲體現(xiàn)，基線(xiàn)平直度直接影響紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度的靈敏度以及影響檢測(cè)下限或使用范圍，是紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)中一個(gè)十分重要的技術(shù)參數(shù)。購(gòu)買(mǎi)者和使用者在選購(gòu)和使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的時(shí)候，對(duì)基線(xiàn)平直度會(huì)有這特別的重視程度，會(huì)作為選購(gòu)和使用的重要技術(shù)指標(biāo)。但是相對(duì)于其他影響紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度的因素來(lái)說(shuō)，基線(xiàn)平直度是受到目前國(guó)內(nèi)外研究工作者重視程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的技術(shù)指標(biāo)。
?。?）光譜帶寬。光譜帶寬是影響紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度的一個(gè)十分重要的因素。當(dāng)光譜帶寬不同時(shí)，測(cè)試得到的數(shù)據(jù)就會(huì)不同，因而不同光譜帶寬下的分析誤差也大相徑庭。
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