紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)是由光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器和信號(hào)處理器等部件組成。光源的功能是提供足夠強(qiáng)度的、穩(wěn)定的連續(xù)光譜。
紫外光區(qū)通常用氫燈或氘燈.見(jiàn)光區(qū)通常用鎢燈或鹵鎢燈。單色器的功能是將光源發(fā)出的復(fù)合光分解并從中分出所需波長(zhǎng)的單色光。色散元件有棱鏡和光柵兩種。
日常維護(hù)
要懂得分析儀器的日常維護(hù)和對(duì)主要技術(shù)指標(biāo)的簡(jiǎn)易測(cè)試方法，經(jīng)常對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)和測(cè)試，以保證儀器工作狀態(tài)。
1.溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。
他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降;造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。
維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正。應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。
2.環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也會(huì)影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開(kāi)關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵等。
3.儀器使用一定周期后，內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃，由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開(kāi)啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作；
同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑，恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校與記錄。
紫外分光光度法(Ultraviolet Spectrophtometry)，又稱(chēng)紫外吸收光譜法( Ultraviolet Moleculor Absorption Spectrophtometry)，它是研究分子吸收190.0~1100.0nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收光譜。紫外吸收光譜主要產(chǎn)生于分子價(jià)電子在電子能級(jí)間的躍遷，是研究物質(zhì)電子光譜的分析方法。通過(guò)測(cè)定分子對(duì)紫外光的吸收，可以對(duì)大量的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物進(jìn)行定性和定量測(cè)定。
苯酚是一種劇毒物質(zhì)，可以致癌，已經(jīng)被列入有機(jī)污染物的黑名單。但在一些藥品、食品添加劑、消毒液等產(chǎn)品中均含有一定量的苯酚。如果其含量超標(biāo)，就會(huì)產(chǎn)生很大的毒害作用。苯酚在紫外光區(qū)的最大吸收波長(zhǎng)λmax=270nm。對(duì)苯酚溶液進(jìn)行掃描時(shí)，在270nm處有較強(qiáng)的吸收峰。
定性分析時(shí)，可在相同的條件下，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，通過(guò)比較未知樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的光譜圖對(duì)未知樣進(jìn)行鑒定。在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)樣品的情況下，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)譜圖或有關(guān)的電子光譜數(shù)據(jù)表進(jìn)行比較。
定量分析是在270nm處測(cè)定不同濃度苯酚的標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光值，并自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再在相同的條件下測(cè)定未知樣品的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可得出未知樣中苯酚的含量。
儀器與試劑
1．紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)
2．容量瓶（1000ml、250ml）
3．比色管（50ml）
4．吸量管（5ml、10ml）
5．苯酚（AR）
準(zhǔn)確稱(chēng)取苯酚1.000g于200ml蒸餾水中，溶解后定量轉(zhuǎn)移到1000ml的容量瓶中，作為儲(chǔ)備液。
紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定苯酚含量實(shí)驗(yàn)步驟
1．打開(kāi)儀器及計(jì)算機(jī)、顯示器、打印機(jī)電源，進(jìn)入軟件操作系統(tǒng)，待儀器自檢結(jié)束，點(diǎn)擊OK，進(jìn)入操作主頁(yè)面。
2．波長(zhǎng)掃描
(1)確定波長(zhǎng)掃描參數(shù)：
光譜帶寬2.0nm
光度測(cè)量形式 吸光值
掃描范圍 200～500nm
掃描速度 1000nm/min
數(shù)據(jù)間隔點(diǎn) 1nm
存儲(chǔ)文件 選擇路徑和文件名
(2)做基線(xiàn)
將盛有參比液的比色皿分別放入?yún)⒈裙饴泛蜆悠饭饴?，開(kāi)始進(jìn)行基線(xiàn)掃描
(3)波長(zhǎng)掃描
將盛有樣品和參比液的比色皿分別放入?yún)⒈裙饴泛蜆悠饭饴?，點(diǎn)擊開(kāi)始掃描
(4)定性分析
將試樣的波長(zhǎng)掃描圖與已知樣的在相同條件下的波長(zhǎng)掃描圖或已知的譜圖相比較，對(duì)試樣進(jìn)行定性分析
3．定量分析
(1) 標(biāo)準(zhǔn)系列的配制
于5支50ml的比色管中，用吸量管分別加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻。
(2) 確定定量分析參數(shù)
設(shè)置a：方法 對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)讀取次數(shù) 1
對(duì)每個(gè)樣品的重復(fù)讀取次數(shù) 1
是否需要測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)樣品 需要
校正曲線(xiàn) 線(xiàn)性
計(jì)算方式 用峰高計(jì)算定量的數(shù)值
b：樣品 總共測(cè)量樣品的個(gè)數(shù) 6
輸入待測(cè)樣品的名稱(chēng) 苯酚
樣品標(biāo)簽從第幾號(hào)開(kāi)始編輯 1
輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度值
在std欄中對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行標(biāo)識(shí)
c：質(zhì)量控制 需要質(zhì)量控制
對(duì)有問(wèn)題的測(cè)量結(jié)果標(biāo)記后繼續(xù)測(cè)量
輸入允許的最大濃度
輸入允許的最低濃度
d：儀器 狹縫 2.0nm
測(cè)定形式 吸光值
強(qiáng)度倍數(shù) 1
工作波長(zhǎng) 270nm
積分時(shí)間 5s
把空白液注入兩個(gè)比色皿內(nèi)，并分別放入?yún)⒈群蜆悠饭饴?，按“zero”進(jìn)行調(diào)零，然后按“OK”
e：報(bào)告 需要報(bào)告 要在線(xiàn)報(bào)告
f：結(jié)果儲(chǔ)存 輸入選擇的路徑與文件名
(3)開(kāi)始定量測(cè)量，按照提示放入各樣品
(4)觀(guān)察標(biāo)準(zhǔn)、樣品及校正曲線(xiàn)
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法從問(wèn)世以來(lái)，在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上，促使分光光度計(jì)儀器的不斷創(chuàng)新，功能更加齊全，使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。
1.原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量， 相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其 特有的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或 測(cè) 定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸 收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
紫外可見(jiàn)分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度 的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比。
2.應(yīng)用
2.1 檢定物質(zhì)
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長(zhǎng)雖ax和摩爾吸收系數(shù)是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應(yīng)用。在國(guó)內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。
2.2 與標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒(méi)有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo) 準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測(cè)定條件要相同。
2.3 比較最大吸收波長(zhǎng)吸收系數(shù)的一致性
2.4 純度檢驗(yàn)
2.5 推測(cè)化合物的分子結(jié)構(gòu)
2.6 氫鍵強(qiáng)度的測(cè)定
實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不 同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑 。
2.7 絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定
2.8 反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究
2.9 在有機(jī)分析中的應(yīng)用
有機(jī)分析是一門(mén)研究有機(jī)化合物的分離、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測(cè)定的科學(xué)，它是在有機(jī)化學(xué)和分析化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的綜合性學(xué)科。
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