液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器。
液相色譜柱的日常維護(hù)：
1、每次開機(jī)時(shí)，流速和柱壓要逐漸增加，突然迅速增加，會(huì)使柱床受到?jīng)_擊，引起紊亂，產(chǎn)生空隙
2、在進(jìn)樣前使色譜系統(tǒng)充分平衡，是否平衡可由基線加以判斷
3、在進(jìn)樣前，檢查色譜系統(tǒng)的各個(gè)接頭，通常由此能發(fā)現(xiàn)是否有漏液現(xiàn)象。如有漏液，空氣會(huì)從漏縫進(jìn)入系統(tǒng)引起基線漂移，影響峰高和峰面積的重復(fù)性
4、不要把柱接頭上得太緊，否則易損壞接頭螺紋，引起滲漏
5、不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽光下，氣流和陽光都會(huì)使柱子產(chǎn)生溫度梯度造成基線漂移；如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的，可以設(shè)法使柱子恒溫
6、若儀器用做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)很多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱壽命
7、如果懷疑樣品會(huì)污染色譜柱，可以用合適的溶劑幾百毫升、慢慢沖洗柱子過夜，第二天早晨再用流動(dòng)相重新平衡柱子約3min、
8、在因裝卸、更換、貯存等而挪動(dòng)柱子時(shí)，動(dòng)作要輕，不要使其受到碰撞，以免柱床因震動(dòng)產(chǎn)生空隙或通道
9、柱要加標(biāo)簽，新舊分開，不要放在溫度變化很大的地方
10、液相色譜柱柱子不用或貯藏時(shí)，應(yīng)封閉并貯存在惰性溶劑中
色譜柱是運(yùn)用于色譜儀系統(tǒng)中起著分離作用的儀器，是色譜儀分析系統(tǒng)的核心部件，色譜柱柱效的高低影響著檢測速率的快慢以及檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，為了提高色譜柱的柱效，保證液相色譜儀分析檢測的靈敏性，了解液相色譜柱的選購技巧尤為重要。
選擇液相色譜柱時(shí)需要考慮的主要因素包括：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量，下面來一一介紹：
1、鍵合相：
確定了正反相后基本就簡單了，正相很簡單，我們重點(diǎn)討論下反相，C18主要分離非極性和弱極性物質(zhì)，因?yàn)槭擎I合硅膠，所以C18也分好幾種有常規(guī)的如C18-A，耐純水的OLAppleC18-AQ、耐酸堿的OLAppleC18-EX等，如果發(fā)現(xiàn)C18保留很弱，調(diào)整流動(dòng)相也不行，這個(gè)時(shí)候可以考慮C8甚至C4等。
2、粒徑：
色譜法追求的是高效、高分辨、高速等。目前來說亞2um填料或者2UM核殼填料是很理想的模型，基本具備“三高”特征尤其是高速，線速度不在影響分離度，不過附帶的缺點(diǎn)就是高壓，要升級(jí)相應(yīng)的硬件，成本高昂，需要謹(jǐn)慎考慮。5um填料較為普遍，目前來說完全可以勝任各種日常檢測，即使有特殊要求，3um色譜填料基本上也能全覆蓋，不過該模型下線速度和分離度是成反比的。
3、孔徑：
目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。開孔的填料多了個(gè)類似分子篩功能，所以選擇孔徑一定要關(guān)注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔徑都很小，可以縮短樣品路徑。所以國際上還有無孔硅膠柱子，也很適合蛋白分離，徹底解決蛋白分子量大和太粘稠堵住孔徑問題。
4、碳載量：
快速柱碳載量很低，如A家等，省時(shí)間，省溶劑，但分析部分復(fù)雜樣品如中藥等有點(diǎn)力不從心，這個(gè)時(shí)候可以考慮英國OLApple色譜柱，碳載量15~23%，碳載量數(shù)值就像河床的水草，越高代表越密集，保留樣品能力越強(qiáng)，越有可能分離開難分離物質(zhì)。
色譜柱在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件。正確使用和維護(hù)色譜柱尤為重要，使用不當(dāng)就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。以下從幾個(gè)方面簡單介紹液相色譜柱在使用過程中應(yīng)當(dāng)著重注意的問題。
一、避免壓力和溫度的急劇變化
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，以保持色譜柱內(nèi)填料的穩(wěn)定性。
二、避免直接改變?nèi)軇┑慕M成
在需要改變檢測樣品溶液組成是，應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然。且在使用次洗脫能力?qiáng)的洗脫液沖洗色譜柱時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
三、避免色譜柱反沖
一般來說色譜柱不能反沖，只有色譜柱使用說明書上標(biāo)明該柱可反沖才可以反沖除去留在柱頭上的雜質(zhì)。否則，反沖色譜柱的影響是迅速降低柱效。
四、避免流動(dòng)相使用不當(dāng)而破壞固定相
選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一段預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
五、禁止樣品未經(jīng)處理直接進(jìn)入色譜柱
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
六、禁止將緩沖溶液長時(shí)間存放在色譜柱內(nèi)
保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間。
七、禁止色譜柱未經(jīng)處理直接封存
色譜柱使用完成之后須使用相宜溶劑進(jìn)行清潔處理，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡；當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無鹽流動(dòng)相沖洗；含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸；裝在液相色譜儀上的色譜柱如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4-5天開機(jī)沖洗15分鐘。
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