分光光度計中zui簡單的和應用zui普遍的一種。它的特點是只有一條光束。通過交換參比和樣品的位置，使其分別進入光路。在參比（溶劑）進入光路時，調(diào)零。然后將樣品進入光路的信號和參比信號進行比較，就可在顯示器上讀出樣品的透過率和吸光度。
分光光度計的保養(yǎng)方法
1.若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
2.指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。
3.比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4.操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5.1900型等分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。
針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預熱時，應打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩(wěn)。
6.放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7.比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進行每次測試前均應進行比較。
具體方法如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調(diào)至100%，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應考慮其對測試結(jié)果的影響。
分光光度計由于在每個波長都需要變換參比和樣品的位置，所以只能手動，不能掃描吸收光譜。它的結(jié)構(gòu)比較簡單，使用也有一定限制，但如配置程序控制和打印裝置，則對一些常規(guī)的定量測定還是比較適用的。
一、光源部分：
?。?）故障：鎢燈不亮；
原因：鎢燈燈絲燒斷（此種原因幾率最高）；
檢查：鎢燈兩端有工作電壓，但燈不亮；取下鎢燈用萬用表電阻檔檢測。
處置：更換新鎢燈；
（2）故障：鎢燈不亮；
原因：沒有點燈電壓；
檢查：保險絲被熔斷；
處置：更換保險絲，（如更換后再次燒斷則要檢查供電電路）；
?。?）故障：氘燈不亮；
原因：氘燈壽命到期（此種原因幾率最高）；
檢查：燈絲電壓、陽極電壓均有，燈絲也可能未斷（可看到燈絲發(fā)紅）；
處置：更換氘燈；
?。?）故障：氘燈不亮；
原因：氘燈起輝電路故障；
檢查：氘燈在起輝的過程中，一般是燈絲先要預熱數(shù)秒鐘，然后燈的陽極與陰極間才可起輝放電，如果燈在起輝的開始瞬間燈內(nèi)閃動一下或連續(xù)閃動，并且更換新的氘燈后依然如此，有可能是起輝電路有故障，燈電流調(diào)整用的大功率晶體管損壞的幾率最大。
二、信號部分：
（1）故障：沒有任何檢測信號輸出；
原因：沒有任何光束照射到樣品室內(nèi)；
檢查：將波長設定為530nm，狹縫盡量開到最寬檔位，在黑暗的環(huán)境下用一張白紙放在樣品室光窗出口處，觀察白紙上有無綠光斑影像；
處置：檢查光源鏡是否轉(zhuǎn)到位？雙光束儀器的切光電機是否轉(zhuǎn)動了（耳朵可以聽見電機轉(zhuǎn)動的聲音）？
（2）故障：樣品室內(nèi)無任何物品的情況下，全波長范圍內(nèi)基線噪聲大；
原因：光源鏡位置不正確、石英窗表面被濺射上樣品；
檢查：觀察光源是否照射到入射狹縫的中央？石英窗上有無污染物？
處置：重新調(diào)整光源鏡的位置，用乙醇清洗石英窗；
?。?）故障：樣品室內(nèi)無任何物品的情況下，僅僅是紫外區(qū)的基線噪聲大；
原因：氘燈老化、光學系統(tǒng)的反光鏡表面劣化、濾光片出現(xiàn)結(jié)晶物；
檢查：可見區(qū)的基線較為平坦，斷電后打開儀器的單色器及上蓋，肉眼可以觀察到光柵、反光鏡表面有一層白色霧狀物覆蓋在上面；如果光學系統(tǒng)正常，最大的可能是氘燈老化，可以通過能量檢查或更換新燈方法加以判斷；
處置：更換氘燈、用火棉膠粘取鏡面上的污物或用研磨膏研磨濾光片（注意：此種技巧需要有一定維修經(jīng)驗者來實施）；
?。?）故障：樣品室放入空白后做基線記憶，噪聲較大，紫外區(qū)尤甚；
原因：比色皿表面或內(nèi)壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白樣品對紫外光譜的吸收太強烈，使放大器超出了校正范圍；
檢查：將波長設定為250nm，先在不放任何物品的狀態(tài)下調(diào)零，然后將空比色皿插入樣品道一側(cè)，此時吸光值應小于0.07Abs；如果大于此值，有可能是比色皿不干凈或使用了玻璃比色皿；同樣方法也可判斷空白溶液的吸光值大?。?/p>
處置：清洗比色皿，更換空白溶液；
?。?）故障：吸光值結(jié)果出現(xiàn)負值（常見）；
原因：沒做空白記憶、樣品的吸光值小于空白參比液；
檢查：將參比液與樣品液調(diào)換位置便知；
處置：做空白記憶、調(diào)換參比液或用參比液配置樣品溶液；
?。?）故障：樣品信號重現(xiàn)性不良；
原因：排除儀器本身的原因外，最大的可能是樣品溶液不均勻所致；在簡易的單光束儀器中，樣品池架一般為推拉式的，有時重復推拉不在同一個位置上；
檢查：更換一種穩(wěn)定的試樣判定；
處置：采取正確的試樣配置手段；修理推拉式樣品架的定位碰珠；
（7）故障：做基線掃描或樣品掃描時，基線或信號有一個大的負脈沖；
原因：掃描速度設置得過快，信號在讀取時，誤將濾光片或光源鏡的切換當做信號讀取了；
檢查：改變掃描速度；
?。?）故障：做基線掃描或樣品掃描時，基線或信號有一個長時間段的負值或滿屏大噪聲；
原因：濾光片飼服電機“失步”，造成檔位錯位，國產(chǎn)電機尤甚；
檢查：重新開機有可能回復，或打開單色器對照波長與濾光片的相對位置來檢查（注意：打開單色器時要保護檢測器不被強光刺激）；
處置：更換飼服電機；
?。?）故障：樣品出峰位置不對；
原因：波長傳動機構(gòu)產(chǎn)生位移；
檢查：通過氘燈的656.1nm的特征譜線來判斷波長是否準確；
處置：對于高檔儀器而言處理手段相對簡單，使用儀器固有的自動校正功能即可；而對于相對簡單的儀器，這種調(diào)整則需要專業(yè)人員來進行了；
?。?0）故障：信號的分辨率不夠，具體表現(xiàn)是：本應疊加在某一大峰上的小峰無法觀察到；
原因：狹縫設置過窄而掃描速度過快，造成檢測器響應速度跟不上，從而失去應測到的信號；按常理，一定的狹縫寬度要對應一定范圍的掃描速度；或者狹縫設置得過寬，使儀器的分辨率下降，將小峰融合在大峰里了。
檢查：放慢掃描速度看一看或?qū)ⅹM縫設窄；
處置：將掃描速度、狹縫寬窄、時間常數(shù)三者擬合成一個優(yōu)化的條件；
?。?1）故障：當儀器波長固定在某個波長下時，吸光值信號上下擺動，特別是測量模式轉(zhuǎn)換為按鍵開關(guān)式的簡易儀器；
原因：開關(guān)觸點因長期氧化所致造成接觸不良；
檢查：用手加重力量按琴鍵時，吸光值隨之變化；
處置：用金屬活化劑清洗按鍵觸點即可；
（12）故障：儀器零點飄忽不定，主要反映在簡易儀器上；
原因：在簡易儀器中，零點往往是通過電位器來調(diào)整，這種電位器一般是炭膜電阻制作的，使用久了往往造成接觸不良；
處置：更換電位器；
還有一點補充一下,如果是PC連接UV時,同志們一定注意接口板別不小心被擊穿,一定要關(guān)機后拔插.若可見部分穩(wěn)定性不好，有可能是鎢燈的供電電壓不穩(wěn)，一般鎢燈電源是穩(wěn)壓電路。
1、波長準確度的檢驗
分光光度計在使用過程中，由于機械振動、溫度變化、燈絲變形、燈座松動或更換燈泡等原因，經(jīng)常會出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實際通過溶液的波長不符合的現(xiàn)象，因而導致儀器靈明度降低，影響測定結(jié)果的精度，需要進行檢驗。
檢驗波長準確度簡單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值，如果，測出的值與濾光片標準值之差超出規(guī)程規(guī)定，則需要進行波長調(diào)節(jié)。
2、透射比正確度的檢驗
用透射比標準值分別為10%、20%、30%左右的光譜中性濾光片，可見光區(qū)分別在440、546、635nm波長處，以空氣為參比，分別測量各濾光片的透射比，紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長處，以高氯酸溶液為參比，測量其透射比。
3、穩(wěn)定度的檢驗
在零點不受光的條件下，用零點調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點，觀察3分鐘讀取透射比的變化，即，為零點穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處，調(diào)節(jié)零點后，蓋上樣品室蓋（打開光門），使光電管受光，調(diào)節(jié)透射比為95%（數(shù)顯儀器調(diào)至100%）察3分鐘讀取透射比的變化，為光電流穩(wěn)定性。
4、光的檢驗
可見分光計棱鏡式儀器在420nm處，光柵式儀器在360nm處，紫外分光計在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片，以空氣為參比，測量其透射比值，即，為儀器在相應波長下的雜散輻射率。
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