液相色譜柱是液相色譜儀的核心部件，且極易因使用不當(dāng)而損壞，不互溶的流動(dòng)相，不正確的保存方式及清洗都會(huì)降低色譜柱的使用壽命。因此液相色譜柱的日常維護(hù)保養(yǎng)極為重要。
1.流動(dòng)方向已明確標(biāo)明在色譜柱上，請(qǐng)正確安裝色譜柱，除非您想沖洗色譜柱入口的污染物，否則，請(qǐng)不要反接色譜柱。
2.反相柱做完實(shí)驗(yàn)后，若使用流動(dòng)相中含有緩沖溶液鹽，請(qǐng)?jiān)谑褂猛戤吅笥貌缓彌_劑的80%水-有機(jī)溶劑流動(dòng)相沖洗色譜柱，后換成100%有機(jī)溶劑貯存。
3.正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用時(shí)需要將柱內(nèi)貯存液用異丙醇置換。
4.流動(dòng)相與樣品在使用前可以用0.45um的微孔濾膜或用預(yù)處理柱（SPE固相萃取小柱）進(jìn)行預(yù)處理，并嚴(yán)格脫氣。
5.流動(dòng)相pH需保持在2-8之間，請(qǐng)盡量不超過(guò)適用范圍。
6.柱溫不要大于60℃。
7.壓力最高不超過(guò)30Mpa，建議在20Mpa以?xún)?nèi)使用。
8.使用新鮮溶劑，防止細(xì)菌增長(zhǎng)。
在液相色譜分離系統(tǒng)中，色譜填料選擇的正確與否會(huì)直接影響到專(zhuān)業(yè)的液相色譜柱分離物質(zhì)效果的好壞。由于液相色譜填料具有相當(dāng)寬的選擇范圍，所以我們?cè)谫?gòu)買(mǎi)液相色譜柱之前有必要對(duì)不同液相色譜填料進(jìn)行一個(gè)簡(jiǎn)單的認(rèn)識(shí)和了解。
第一、正相色譜硅膠基質(zhì)填料。
正相色譜柱的固定相是由硅膠和其他具有極性官能團(tuán)組成的鍵合相填料。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較弱組合最先被色譜柱沖洗出來(lái)。而且正相色譜所使用的流動(dòng)相其極性要低于固定相，流動(dòng)相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。
第二、反相色譜硅膠基質(zhì)填料。
反向色譜柱的填料是以硅膠材料為主要物質(zhì)，并與極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)組成的鍵合相。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較強(qiáng)組合最先被色譜柱沖洗出來(lái)，而極性弱的組分則會(huì)更強(qiáng)的保留在柱子上。反向色譜的流動(dòng)相的極性相對(duì)較強(qiáng)，常配制有機(jī)緩沖液作為流動(dòng)相。目前較為常用的反相色譜填料有C4（B）、C8（MOS）以及C18（ODS）等。
第三、聚合物填料。
這種聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯組成。其特點(diǎn)是這種色譜柱的酸堿度適用范圍相對(duì)較廣，且疏水性很強(qiáng)，但它的柱效相對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料要低一些。一般將這種大孔的基質(zhì)填料用于蛋白質(zhì)的分離。
第四、其他無(wú)機(jī)填料。
如石墨化碳對(duì)于酸堿度和溫度沒(méi)用嚴(yán)格的限制范圍，一般可對(duì)一些幾何導(dǎo)構(gòu)體進(jìn)行分離。此外還有氧化鋁以及氧化鋯等無(wú)機(jī)填料的應(yīng)用。
總而言之，如果我們能夠全面系統(tǒng)的了解一下液相色譜柱填料的分類(lèi)及特點(diǎn)，那么我們?cè)谶x擇購(gòu)買(mǎi)一流的色譜柱時(shí)就可以在一個(gè)相對(duì)較小的范圍內(nèi)順利找到自己所需要的產(chǎn)品。這樣我們就可以在節(jié)省選擇購(gòu)買(mǎi)時(shí)間的同時(shí)，也能快速買(mǎi)到令自己滿(mǎn)意的色譜柱。
色譜柱是運(yùn)用于色譜儀系統(tǒng)中起著分離作用的儀器，是色譜儀分析系統(tǒng)的核心部件，色譜柱柱效的高低影響著檢測(cè)速率的快慢以及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，為了提高色譜柱的柱效，保證液相色譜儀分析檢測(cè)的靈敏性，了解液相色譜柱的選購(gòu)技巧尤為重要。
選擇液相色譜柱時(shí)需要考慮的主要因素包括：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量，下面來(lái)一一介紹：
1、鍵合相：
確定了正反相后基本就簡(jiǎn)單了，正相很簡(jiǎn)單，我們重點(diǎn)討論下反相，C18主要分離非極性和弱極性物質(zhì)，因?yàn)槭擎I合硅膠，所以C18也分好幾種有常規(guī)的如C18-A，耐純水的OLAppleC18-AQ、耐酸堿的OLAppleC18-EX等，如果發(fā)現(xiàn)C18保留很弱，調(diào)整流動(dòng)相也不行，這個(gè)時(shí)候可以考慮C8甚至C4等。
2、粒徑：
色譜法追求的是高效、高分辨、高速等。目前來(lái)說(shuō)亞2um填料或者2UM核殼填料是很理想的模型，基本具備“三高”特征尤其是高速，線(xiàn)速度不在影響分離度，不過(guò)附帶的缺點(diǎn)就是高壓，要升級(jí)相應(yīng)的硬件，成本高昂，需要謹(jǐn)慎考慮。5um填料較為普遍，目前來(lái)說(shuō)完全可以勝任各種日常檢測(cè)，即使有特殊要求，3um色譜填料基本上也能全覆蓋，不過(guò)該模型下線(xiàn)速度和分離度是成反比的。
3、孔徑：
目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。開(kāi)孔的填料多了個(gè)類(lèi)似分子篩功能，所以選擇孔徑一定要關(guān)注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔徑都很小，可以縮短樣品路徑。所以國(guó)際上還有無(wú)孔硅膠柱子，也很適合蛋白分離，徹底解決蛋白分子量大和太粘稠堵住孔徑問(wèn)題。
4、碳載量：
快速柱碳載量很低，如A家等，省時(shí)間，省溶劑，但分析部分復(fù)雜樣品如中藥等有點(diǎn)力不從心，這個(gè)時(shí)候可以考慮英國(guó)OLApple色譜柱，碳載量15~23%，碳載量數(shù)值就像河床的水草，越高代表越密集，保留樣品能力越強(qiáng)，越有可能分離開(kāi)難分離物質(zhì)。
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