高效液相色譜儀分析中，選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)考慮流動(dòng)相與填料的作用、純度、與檢測(cè)器的匹配、粘度、對(duì)樣品的溶解度和樣品回收等方面。
1、流動(dòng)相與填料的作用：
流動(dòng)相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)。
低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會(huì)溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。
堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。
酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁和氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。
2、純度：
色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過有關(guān)，特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。
3、與檢測(cè)器的匹配：
當(dāng)使用UVD時(shí)，所用流動(dòng)相在檢測(cè)波長(zhǎng)下應(yīng)沒有吸收或吸收很小。
當(dāng)使用RID時(shí)，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相，以提高靈敏度。
4、粘度：
高粘度溶劑會(huì)影響溶質(zhì)的擴(kuò)散和傳質(zhì)，使柱效降低，還會(huì)使柱壓增加，分離時(shí)間延長(zhǎng)。盡量選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動(dòng)相。
5、對(duì)樣品的溶解度：如果溶解度欠佳，樣品會(huì)在色譜柱內(nèi)沉淀，不但影響純化分離，而且會(huì)使色譜柱惡化。
6、樣品回收：應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。
高效液相色譜儀分析選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的問題：
1.盡量使用高純度溶劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。不純的溶劑會(huì)引起基線不穩(wěn)，產(chǎn)生偽峰。
2.避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降和損壞色譜柱，如使固定液溶解流失和酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。
3.樣品在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。
4.流動(dòng)相粘度低（粘度適中）。若使用高粘度溶劑，會(huì)增高壓力，不利于分離。常用低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度過低的溶劑也不宜采用，如戊烷等，它們?nèi)菀自谏V柱和檢測(cè)器內(nèi)形成氣泡，影響分離。
5.化學(xué)穩(wěn)定性好。
6.流動(dòng)相應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。
對(duì)于紫外吸收檢測(cè)器，應(yīng)注意選用檢測(cè)器波長(zhǎng)比溶劑的紫外截止波長(zhǎng)長(zhǎng)。所謂溶劑的紫外截止波長(zhǎng)是指當(dāng)小于截止波長(zhǎng)的輻射通過溶劑時(shí)，溶劑對(duì)此輻射產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收，此時(shí)溶劑被看作是光學(xué)不透明的，會(huì)嚴(yán)重干擾組分的吸收測(cè)量。
對(duì)于示差折光檢測(cè)器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動(dòng)相，以達(dá)到zui高靈敏度。
液相色譜儀，看你分離的樣品的種類，看流動(dòng)相是否和樣品互溶，分離程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多種，看樣品的沸點(diǎn)，溶解性。
高效液相色譜儀分析中進(jìn)樣基線很好，保留時(shí)間能鎖定，壓力也穩(wěn)定，但是峰面積差別很大，大概有2倍的差別，這種情況出現(xiàn)的原因可能是多方面的，建議采用以下方法解決：
1、調(diào)換一根新色譜柱，如果情況一樣，則排除柱子的原因。
2、將在線過濾器拆下，用超聲波清洗，如果結(jié)果一樣，說明與在線過濾器無關(guān)。
3、考慮是不是進(jìn)樣閥有問題或者定量環(huán)堵。建議多進(jìn)幾針樣品，看是否有規(guī)律，如果沒有規(guī)律，應(yīng)檢查一下進(jìn)樣器的其他部位，如果是進(jìn)樣器系統(tǒng)出現(xiàn)問題，應(yīng)盡快解決之。
4、對(duì)進(jìn)樣器清洗一下，清洗干凈后先進(jìn)一針空白，再進(jìn)樣，看看結(jié)果如何，如果有明顯減少，那可能是進(jìn)樣器污染，有樣品殘留在進(jìn)樣閥體內(nèi)，在切換的過程中被流動(dòng)相帶入色譜柱。
5、考慮樣品溶液是否均勻。建議同一個(gè)濃度連續(xù)進(jìn)樣5次，看一下結(jié)果如何變化，有沒有規(guī)律；如果是樣品溶液不均勻，可以再攪拌一下。
6、考慮光源是不是正常。
7、考慮濃度是否在線性范圍內(nèi)。有時(shí)候定量時(shí)濃度太高或太低都會(huì)產(chǎn)生較大的分析誤差。
8、考慮取樣方式是否正確，每次取樣后是否對(duì)針頭外面的附著液進(jìn)行清除。
9、高效液相色譜儀的計(jì)算機(jī)軟件編制可能存在問題。對(duì)比可以適當(dāng)改變軟件。
一、樣品預(yù)處理的重要性：
1、樣品預(yù)處理所用時(shí)間遠(yuǎn)大于色譜分離時(shí)間。
2、消耗大量的溶劑和其它化學(xué)品，占分析消耗總成本最大。
3、樣品預(yù)處理是實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性最差的環(huán)節(jié)，是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果好壞的重要因素。
二、樣品預(yù)處理的目的：
1、除去微粒，減少干擾雜質(zhì)。
2、濃縮微量組分。
3、提高檢測(cè)的選擇性和靈敏度。
4、改善分離效果。
5、有利于色譜柱和儀器的保護(hù)。
6、使樣品形式和所用溶劑符合HPLC的要求。
三、樣品預(yù)處理達(dá)到的要求：
1、樣品全部轉(zhuǎn)化為低濃度溶液。
2、樣品溶液洗脫強(qiáng)度低于流動(dòng)相，與流動(dòng)相相溶。
四、樣品預(yù)處理的原則：
1、在樣品預(yù)處理過程中，盡可能防止和避免與待測(cè)組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
2、在樣品預(yù)處理過程中，如果與待測(cè)組分進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，那么這一反應(yīng)必須是已知的，而且可以定量的完成。
3、在樣品預(yù)處理過程中，要防止和避免待待測(cè)組分被玷污，盡可能減少無關(guān)化合物引入制備過程。
4、樣品的處理過程應(yīng)盡可能簡(jiǎn)單易行，所采用的樣品處理裝置尺寸應(yīng)與樣品處理量相適應(yīng)。
5、采樣之后應(yīng)盡可能快的進(jìn)行樣品的分析測(cè)定，或使用合適的方法消除可能的變化和干擾。
五、樣品預(yù)處理方法：
1、過濾、離心：
常用的濾膜材質(zhì)有纖維素、聚四氟乙烯和聚酰胺。其中聚酰胺應(yīng)用廣泛。
2、加速溶劑萃?。?/p>
加速溶劑萃取是在提高溫度（50～200℃）和壓力（10.3～20.6MPa）下，用溶劑萃取固體或半固體樣品。
3、超臨界流體萃?。?/p>
超臨界流體萃取是利用超臨界流體對(duì)物質(zhì)的特殊溶解性能原理而建立的萃取方法。
4、固相萃?。?/p>
固相萃取是通過采用選擇性吸附和選擇性洗脫對(duì)樣品進(jìn)行富集、分離和凈化，可以將其近似地看作一種簡(jiǎn)單的液固色譜過程。
5、固相微萃?。?/p>
固相微萃取是基于涂敷在纖維上的高分子涂層或吸附劑和樣品之間的吸附－解吸平衡原理，集采樣、萃取、濃縮和進(jìn)樣于一體的無溶劑的樣品微萃取方法。
有直接固相微萃取、頂空固相微萃取、膜固相微萃取和毛細(xì)管固相微萃取等。
6、液相微萃?。?/p>
液相微萃取是基于樣品和微升級(jí)甚至納升級(jí)有機(jī)溶劑之間的分配平衡原理，集采樣、萃取和濃縮于一體的環(huán)境友好的樣品微萃取方法。
有直接液相微萃取、中空纖維液相微萃取和頂空液相微萃取等。
7、衍生化：
有紫外衍生化、熒光衍生化和電化學(xué)衍生化等。
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