液相色譜柱，是一種用于液體色譜分析儀器的部件。那么我們該如何的去選擇液相色譜柱呢?
下面我們就一起來看看吧。
在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等，液相色譜柱決定最終分離效果，所以在選擇色譜柱時候有必要考慮清楚自己的需求。
首先液相色譜柱目前來說分為正反相色譜柱，正相有SI等，反相有C18等。正相主要分離極性物質(zhì)，反相主要分離非極性物質(zhì)，氨基柱等主要分離二者之間的。
明確了色譜柱大概功能之后，確認下自己樣品信息，基本就有點眉目了，方向?qū)α?，剩下的事情就是細?jié)了如：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量等
1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2.如果樣品極性太強，或酸性太強;可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長；
對流動相pH要求比較精密，否則很難重復實驗，另外離子對試劑很難洗下來，基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)
3.若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術或堿去活技術等)；
他們都會減少堿性化合物的拖尾，一般會選擇中性或偏堿的條件下做，因為這樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強，或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點是方法開發(fā)簡單；
缺點是目前實現(xiàn)這一技術的色譜柱品牌比較少，價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用；
這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點是不能用來分析其它樣品，對流動相pH要求比較精密，否則很難重復實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。
反相高效液相色譜柱是基于溶質(zhì)、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結(jié)構(gòu)中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高。
在高效液相色譜中這是應用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機改性劑，大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少量高聚物微球。
反相高效液相色譜柱的使用和維護
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
(1)柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。
(2)如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。
(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
(4)應逐
漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
(5)如使用柱溫控制裝置時，應注意在通人流動相后才能升溫。
(6)一般說來反相高效液相色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
(7)選擇使用適宜的流動相，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
(8)避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
(9)經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。
(10)保存色譜柱時應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。
(11)反相高效液相色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗；另一種可能是大分子進人柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
(12)在完成分離分析工作之后，不應立即停機，需及時對色譜分析系統(tǒng)進行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
在日常分離分析工作中，反相高效液相色譜柱的正確使用和維護十分重要，色譜柱使用是否得當，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
色譜柱在使用前，可以進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行（出廠測試所使用的條件是較佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理；
a、可以使用流動相溶解樣品；
b、使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)；
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長期留在柱中）；
b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應；
c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）；
d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制；
e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行；
f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當選用較佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間（如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量）。
注意：
a.含水流動相可以在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜?？梢约尤氙B氮化鈉，防止細菌生長；
b.流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)；
c.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
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