一.主要技術(shù)指標優(yōu)異:
首先是如何看指標。液相色譜儀的指標很多,有泵的、的、等等。我們認為要看主要技術(shù)指標,根據(jù)國家標準,儀器的主要指標有噪音,漂移,最小檢測濃度,定性定量重復性等。這些指標都要放在系統(tǒng),回路里去看,去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好,如接好色譜柱,進樣閥,并且要通上流動相。因為您在分析中也都是聯(lián)接好以后才可以進行分析的,而不是單單用個檢測器或是泵的。
然后在這個基礎(chǔ)上,我們再去比較這些主要指標。
1.噪音
噪音是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度,噪音越大,檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好,否則噪音過大將會導致基線不穩(wěn),甚至影響分析結(jié)果。
2.最小檢測濃度(最小檢測限)
最小檢測濃度是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H(CL :最小檢測濃度 Nd:噪音C:樣品濃度最小檢測濃度H:樣品峰高)由上式可見,最小檢測濃度是和噪音成正比的,噪音越大,最小檢測濃度就越大,靈敏度就越低。某些廠家回避了這個指標,說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音。
3.漂移
漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離**的距離,通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達到穩(wěn)定,從而在一定程度上提高了分析效率。
4.定性定量重復性
定性定量重復性主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標,這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應該是十分優(yōu)秀的,這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性,這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
有的朋友會認為這些指標好像都是檢測器的。對的,但是就前面所說條件是要放在整個回路和系統(tǒng)里去看去比較。例如:泵的脈動會直接影響噪音指標,泵的流量準確度、精確度指標,以及密封性不好也會影響相關(guān)指標。所以要系統(tǒng)地看指標。例如:某些公司在公布的指標中,噪音和漂移指標寫的條件是空池或有的干脆不寫。這個指標只考核了UV檢測器光學和電氣的特性,與實際情況相差甚遠,并沒有考驗泵的壓力脈動,液流回路的阻尼和UV檢測器流通池的性能。所以我們認為從以上的主要指標中可以反應出儀器的一些真實水平。
二.操作方便:
操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單,有利于提高分析效率,也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。
三.系統(tǒng)的,整體開發(fā):
這里指的是儀器的整體開發(fā),是一個完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個現(xiàn)象,說我的泵是進口的,或者是檢測器怎么好,用了什么很多的進口件組裝等等。其實這是個誤區(qū)。液相色譜儀是個復雜的系統(tǒng),不是整體開發(fā)的,各項指標之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配,整體水平不會高到哪里去,而且在售后服務(wù)方面對用戶也是不負責任的。
整體開發(fā)的主要優(yōu)點有:各項技術(shù)指標統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個整體的數(shù)字化評價系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實力。
國外知名的儀器生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品也是整體開發(fā)的,所以能夠保證儀器的整體水平。
四.穩(wěn)定可靠,故障率低。
液相色譜儀的應用,可用于高沸點、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來說,沸點在450℃以下,相對分子質(zhì)量小于450的有機物可用液相色譜儀分析,但這些物質(zhì)只占有機物的15%~20%,其余的80%~85%有機物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護,色譜柱的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快,避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
反沖色譜柱,一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效,預柱和保護柱,選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。
有時可以在進樣器前面連接一預柱,分析柱是鍵合硅膠時,預柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu),由輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理,利用混合物各組分在固定相和流動相中溶解、分配或吸附等化學作用性能的差異,使各組分在作相對運動的兩相中反復多次受到上述各作用力而達到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到,色譜柱是實現(xiàn)分離的核心部件,要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料:經(jīng)過制備處理后,用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒,通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管:內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm,長250mm。
色譜柱:也稱固定相,是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的,色譜柱的填充,干法填充:在硬臺面上鋪上軟墊,將空柱管上端打開垂直放在軟墊上,用漏斗每次灌入50-100mg填料,然后垂直臺面墩10-20次。
濕法填充:又稱淤漿填充法,使用專門的填充裝置。
任何顆粒物進進高效液相色譜儀后都會在柱子進口端被篩板擋住,最后的結(jié)果是將柱子堵塞,表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此,要采取各種預防措施,包括操縱步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計,努力防止或減少顆粒物進進高效液相色譜儀中,從而延長儀器和色譜柱的使用壽命,并進步數(shù)據(jù)的可靠性。
在高效液相色譜儀中,顆粒物的主要來源有三個途徑:活動相、被測樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
1、被測樣品
使用針筒式過濾器不可能100%得到通過過濾器的被測樣品,總會或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面:過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等。
2、活動相
無論是高效液相色譜儀HPLC級的水還是在實驗室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水,最后一步也是通過0.2μm微孔濾膜。任何一種緩沖液中加進了固體物,必然活動相過濾將。少量雜質(zhì)顆粒存在于活動相中必然成為殘渣。
解決辦法:
2.1.活動相制備僅采用HPLC級液體時不需要過濾,反之所有活動相組成在使用前必須過濾。
2.2.在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端進口采用下沉式過濾器(常見材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種)也是很重要的。這個過濾器的規(guī)格為≥10μm的微孔物質(zhì),所以它不能取代活動相過濾步驟,但是它能除往系統(tǒng)中的塵土并保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。
2.3.推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個0.45或0.5μm的在線多孔過濾器,接在自動進樣器和柱子之間,即使已使用了保護柱。這個在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板,而且如采用一個玻璃砂芯濾板,既便宜,更換又方便(幾分鐘就可更換)。若采用在線過濾,高效液相色譜儀檢測每批樣品開始前記錄下壓力值,當壓力上升一定值,例如25%或增加500psi,應該更換玻璃砂芯濾板了,更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復到原來的壓力值。
3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物
最后,在高效液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
3.1.在一般實驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年,因此建議半年或一年更換這些密封墊。
3.2.原裝密封墊的密封效果可以,更換以后輕易引起活動相滲漏。所以,只要不漏液就不要輕易更換密封墊。