分光光度計(jì)是利用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收進(jìn)行物質(zhì)的定性或定量分析的儀器，在各行各業(yè)得到了廣泛應(yīng)用，主要用于物質(zhì)純度檢查、定量分析、物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒別等?？蓽y(cè)量結(jié)果總會(huì)出現(xiàn)可接受或不可接受的誤差，誤差來(lái)源于測(cè)量過(guò)程的各個(gè)方面，我認(rèn)為主要來(lái)源于儀器本身性能和測(cè)量條件的選擇兩個(gè)方面。
一、儀器本身性能帶來(lái)的誤差
1.雜散光的影響
雜散光是指進(jìn)人檢測(cè)器的處于待測(cè)波長(zhǎng)光譜帶寬范圍外的其他波長(zhǎng)組分，它是光譜測(cè)量中誤差的主要來(lái)源。產(chǎn)生原因有:分光光度計(jì)的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長(zhǎng)處，由于單色器透光率、光源輻射強(qiáng)度、檢測(cè)器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著。雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測(cè)量誤差，實(shí)際工作中，在定量分析時(shí)，一般在吸收峰或其附近處測(cè)量樣品吸光度，如果在分析波長(zhǎng)處含有雜散光，這時(shí)樣品的透光率較小，而雜散光大部分透過(guò)，使測(cè)量吸光度低于真實(shí)吸光度。
2.儀器噪聲對(duì)測(cè)量的影響
儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo)，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測(cè)量的分析信號(hào)中的不需要的信號(hào)，掃描100%T和0%T線，可觀察到分光光度計(jì)的絕對(duì)噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會(huì)掩蓋較小的測(cè)量信號(hào)，一般用噪音的二倍來(lái)表示儀器的靈敏度。
3.波長(zhǎng)和吸光度準(zhǔn)確度
樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長(zhǎng)下測(cè)得的，如果波長(zhǎng)誤差很大，測(cè)出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對(duì)儀器的直接要求，更應(yīng)引起足夠的重視。國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為A級(jí)士0.6%,B級(jí)土1.0%。
二、測(cè)量條件的選擇
1.吸光度范圍的選擇
試樣在不同吸光度時(shí)，濃度的相對(duì)誤差不同，一般選擇A二0.2一0.8之間，濃度相對(duì)誤差較小，可以通過(guò)改變吸收池厚度、檢測(cè)波長(zhǎng)或待測(cè)溶液濃度，使吸光度讀數(shù)在適宜范圍內(nèi)。
2.狹縫寬度的選擇
狹縫寬度不僅影響光譜的純度，也影響吸光度值，在定量分析時(shí)，為了得到足夠的測(cè)量信號(hào)，應(yīng)采用較大狹縫。在定性分析時(shí)，為了提高分辨率，應(yīng)采用較小狹縫，以獲得精細(xì)的光譜結(jié)構(gòu)。
3.吸收池的選擇和使用
吸收池的規(guī)格應(yīng)根據(jù)被測(cè)溶液顏色深淺來(lái)確定，一般是被測(cè)溶液顏色深時(shí)選光程短的，顏色淺時(shí)選光程長(zhǎng)的，同一實(shí)驗(yàn)使用同一規(guī)格同一套吸收池。在定量測(cè)量之前需要對(duì)吸收池作校正和配對(duì)工作，吸收池不匹配時(shí)，對(duì)測(cè)量產(chǎn)生誤差，吸收池方向不同，透光率亦有差異，使用時(shí)應(yīng)注意方向。比色皿毛玻璃一面的上端有一個(gè)箭頭，應(yīng)與光路保持一致。另外，使用時(shí)，不要把溶液注得太滿，以防在推動(dòng)比色皿架時(shí)溶液溢出皿外。如透光壁外有溶液存在，要擦干再測(cè)，否則將產(chǎn)生誤差。
分光光度計(jì)的正確使用和保養(yǎng)也很重要，我們應(yīng)該做到以下幾點(diǎn):堅(jiān)持標(biāo)準(zhǔn)溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，不使用過(guò)期溶液，比色皿應(yīng)保持清潔、干燥，禁止用硬物碰擦透明表面；防止儀器振動(dòng)，影響測(cè)量穩(wěn)定性;在開(kāi)機(jī)狀態(tài)，不測(cè)量時(shí)，應(yīng)打開(kāi)樣品池門，延長(zhǎng)光電傳感器壽命；樣品集中測(cè)量，避免開(kāi)機(jī)次數(shù)，延長(zhǎng)光源壽命；一旦停機(jī)，則應(yīng)待燈冷卻后再重新啟動(dòng)，并預(yù)熱15min左右再使用；要經(jīng)常更換儀器的干燥劑，防止光學(xué)元件和光電傳感器受潮生霉；儀器搬動(dòng)或更換重要部件后，要重新進(jìn)行性能確認(rèn)，以保證測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確。
分光光度計(jì)中zui簡(jiǎn)單的和應(yīng)用zui普遍的一種。它的特點(diǎn)是只有一條光束。通過(guò)交換參比和樣品的位置，使其分別進(jìn)入光路。在參比（溶劑）進(jìn)入光路時(shí)，調(diào)零。然后將樣品進(jìn)入光路的信號(hào)和參比信號(hào)進(jìn)行比較，就可在顯示器上讀出樣品的透過(guò)率和吸光度。
分光光度計(jì)的保養(yǎng)方法
1.若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。
2.指針式儀器在未接通電源時(shí)，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
3.比色皿使用完畢后，請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4.操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5.1900型等分光光度計(jì)，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測(cè)微弱光電信號(hào)，而不能用來(lái)檢測(cè)強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移，靈敏度下降。
針對(duì)其上述特點(diǎn)，在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，因此在預(yù)熱時(shí)，應(yīng)打開(kāi)比色皿蓋或使用擋光桿，避免長(zhǎng)時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6.放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7.比色杯的配套性問(wèn)題。比色杯必須配套使用，否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。
具體方法如下;分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長(zhǎng)處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至100%，測(cè)量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。
分光光度計(jì)由于在每個(gè)波長(zhǎng)都需要變換參比和樣品的位置，所以只能手動(dòng)，不能掃描吸收光譜。它的結(jié)構(gòu)比較簡(jiǎn)單，使用也有一定限制，但如配置程序控制和打印裝置，則對(duì)一些常規(guī)的定量測(cè)定還是比較適用的。
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