故障現(xiàn)象:
峰展寬
可能的原因:
(1)進樣體積過大
(2) 柱外體積過大
(3) 流動相粘度過高
(4) 保留時間過長
(5)樣品超載
(6)緩沖液溶度太低
(7)保護柱污染或失效
(8)色譜柱污染或失效,柱效太低
(9)呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的峰
(10)柱溫過低
YL9100液相色譜儀
排除方法:
(1)減小進樣體積
(2)檢查各接頭處的連接,避免死體積形成
(3)增加柱溫,采用低粘度流動相
(4)等度洗脫時增加強溶劑濃度,或采用梯度洗脫
(5)稀釋樣品,或采用小體積進樣
(6)增加濃度
(7)更換保護柱
(8)清洗或更換色譜柱
(9)選擇其他色譜柱改善分離效果
(10)適當提高柱溫
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貯液裝置、高壓輸液泵、過濾器、脫氣裝置等
1. 貯液器:貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純,貯液器材料要耐腐蝕,對溶劑呈惰性。貯液器應配有溶劑過濾器,以防止活動相中的顆粒進進泵內(nèi)。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成,空隙大小一般為2mm。
2. 脫氣裝置:脫氣的目的是為了防止活動相從高壓柱內(nèi)流出時,開釋出氣泡進進檢測器而使噪聲劇增,甚至不能正常檢測。
3. 高壓輸液泵 高壓輸液泵是高效液相色譜儀的重要部件,是驅(qū)動溶劑和樣品通過色譜柱和檢測系統(tǒng)的高壓源,其性能好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性。
對高壓泵的基本要求是:
?、倭髁糠€(wěn)定;②輸出壓力高,最高輸出壓力為50Mpa;③流量范圍寬,可在0.01~10ml/min范圍任選。④耐酸、堿、緩沖液腐蝕。⑤壓力波動小。
2. 梯度洗脫裝置 梯度洗脫是利用兩種或兩種以上的溶劑,按照一定時間程序連續(xù)或階段地改變配比濃度,以達到改變活動相極性、離子強度或pH值,從而進步洗脫能力,改善分離的一種有效方法。當一個樣品混合物的容量因子是范圍很寬,用等度洗脫時間太長,且后出的峰形扁平不便檢測時,用梯度洗脫可以改善峰形、并縮短分離時間。HPLC的梯度洗脫與GC的程序升溫相似,可以縮短分析時間,進步分離效果。使所有的峰都處于較佳分離狀態(tài),而且峰形尖而窄。
二. 進樣器
進樣器一般要求密封性好,死體積小,重復性好,保證中心進樣,進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動小,并便于實現(xiàn)自動化。
高壓進樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類很多,有六通閥、四通閥,雙路閥等。以六通進樣閥較為常用。
三.分離系統(tǒng)
色譜分離系統(tǒng)包括色譜柱、固定相和活動相。色譜柱是其核心部分,柱應具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內(nèi)死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長的要求。通常采用優(yōu)質(zhì)不銹鋼管制成。
色譜柱按內(nèi)徑不同可分為常規(guī)柱、快速柱和微量柱三類。
常規(guī)分析柱柱長一般為10~25cm,內(nèi)徑4 ~ 5mm,固定相顆粒直徑為 5 ~ 10 mm。為了保護分析柱不受污染,一般在分析柱前加一短柱,約數(shù)厘米長,稱為保護柱。
?。ㄎ⒘糠治鲋鶅?nèi)徑小于l mm,凝膠色譜往內(nèi)徑3~12 mm,制備往內(nèi)徑較大,可達25 mm以上。)
四. 檢測系統(tǒng)
檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發(fā)光等。
液相色譜柱是液相色譜儀的核心部件,且極易因使用不當而損壞,不互溶的流動相,不正確的保存方式及清洗都會降低色譜柱的使用壽命。因此液相色譜柱的日常維護保養(yǎng)極為重要。
1.流動方向已明確標明在色譜柱上,請正確安裝色譜柱,除非您想沖洗色譜柱入口的污染物,否則,請不要反接色譜柱。
2.反相柱做完實驗后,若使用流動相中含有緩沖溶液鹽,請在使用完畢后用不含緩沖劑的80%水-有機溶劑流動相沖洗色譜柱,后換成100%有機溶劑貯存。
3.正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中,反相使用時需要將柱內(nèi)貯存液用異丙醇置換。
4.流動相與樣品在使用前可以用0.45um的微孔濾膜或用預處理柱(SPE固相萃取小柱)進行預處理,并嚴格脫氣。
5.流動相pH需保持在2-8之間,請盡量不超過適用范圍。
6.柱溫不要大于60℃。
7.壓力最高不超過30Mpa,建議在20Mpa以內(nèi)使用。
8.使用新鮮溶劑,防止細菌增長。
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