液相色譜柱，是一種用于液體色譜分析儀器的部件。那么我們?cè)撊绾蔚娜ミx擇液相色譜柱呢?
下面我們就一起來(lái)看看吧。
在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等，液相色譜柱決定最終分離效果，所以在選擇色譜柱時(shí)候有必要考慮清楚自己的需求。
首先液相色譜柱目前來(lái)說(shuō)分為正反相色譜柱，正相有SI等，反相有C18等。正相主要分離極性物質(zhì)，反相主要分離非極性物質(zhì)，氨基柱等主要分離二者之間的。
明確了色譜柱大概功能之后，確認(rèn)下自己樣品信息，基本就有點(diǎn)眉目了，方向?qū)α?，剩下的事情就是?xì)節(jié)了如：鍵合相、粒徑、孔徑、碳載量等
1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè)，即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱
2.如果樣品極性太強(qiáng)，或酸性太強(qiáng);可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱(缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng)；
對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)，另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái)，基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn))
3.若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等)；
他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng)，或堿性太強(qiáng);可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)(優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單；
缺點(diǎn)是目前實(shí)現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少，價(jià)格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用；
這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法)選擇強(qiáng)離子交換柱(缺點(diǎn)是不能用來(lái)分析其它樣品，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn))也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。
液相色譜儀的應(yīng)用，可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來(lái)說(shuō)，沸點(diǎn)在450℃以下，相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%～20%，其余的80%～85%有機(jī)物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護(hù)，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
反沖色譜柱，一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效，預(yù)柱和保護(hù)柱，選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)，由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理，利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料：經(jīng)過(guò)制備處理后，用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒，通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管：內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm，長(zhǎng)250mm。
色譜柱：也稱固定相，是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的，色譜柱的填充，干法填充：在硬臺(tái)面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開(kāi)垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺(tái)面墩10-20次。
濕法填充：又稱淤漿填充法，使用專門的填充裝置。
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