在我們平常的工作當(dāng)中，液相色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，液相色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響液相色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在液相色譜操作過程中，我們需要了解下面的問題，方便維護(hù)液相色譜柱。
1.柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。
2.如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。
3.避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使液相色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
4.應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
5.如使用柱溫控制裝置時(shí)，應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。
6.一般說來液相色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
7.選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
8.避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
9.經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗液相色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。
10.保存液相色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間。
11.液相色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
12.在完成分離分析工作之后，不能馬上就關(guān)機(jī)，需及時(shí)對色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般0.5h以上，以除去液相色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
液相色譜儀作為分析實(shí)驗(yàn)室高端必備儀器之一，是實(shí)驗(yàn)室分析員應(yīng)用頻率較高的儀器，縱然是經(jīng)常使用的經(jīng)驗(yàn)豐富的老司機(jī)在使用過程里不可避免的還是往往疏忽一些問題，從而導(dǎo)致一些儀器的故障。方便快速的分析過程固然重要，但是為了多種樣品而忽略了一些細(xì)節(jié)步驟，總是會犯些錯(cuò)。在使用液相色譜儀時(shí)四大關(guān)鍵因素，對正確使用極為重要，下面給大家說說：
1、液相色譜儀本身：
對于儀器本身一般不會有問題，特別是剛買回來的新儀器。對于儀器本身重要的就是儀器的校驗(yàn)，剛買回來的儀器一般都是由賣家先對儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作（包括IQ、PQ、OQ），確認(rèn)順利通過后，再請國家或省級儀器檢定局的來校驗(yàn)，檢定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會對儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗(yàn)，目的就是為了保證儀器的正?？蛇\(yùn)行狀態(tài)。
2、色譜條件：
色譜條件一般包括流動(dòng)相、色譜柱、檢測波長、流速及進(jìn)樣量。
流動(dòng)相就涉及到配制流動(dòng)相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18、2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因?yàn)榉乐顾驮噭┰囈褐械碾s質(zhì)對色譜結(jié)果的干擾。
色譜柱會因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個(gè)在色譜柱說明書上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行，否則會造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測波長也會因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測器氘燈能量的變化，比如基線波動(dòng)大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時(shí)，但實(shí)際上使用時(shí)間不止，可根據(jù)實(shí)際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1、0ml/min，流速是不可隨意改動(dòng)的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時(shí)為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗(yàn)證，會對流速進(jìn)行改變以評價(jià)方法的適用性。對于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，如果使用六通閥自動(dòng)進(jìn)樣，一般進(jìn)樣精密度都很好，不需強(qiáng)調(diào)什么。
3、操作人員：
首先，作為液相色譜儀操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)液相的說明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護(hù)保養(yǎng)，掌握最基礎(chǔ)故障的排除和維修。
一般液相色譜儀的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作，一般不會出現(xiàn)問題，當(dāng)然這里需要特別指出的是對于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要，比如流動(dòng)相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅(jiān)持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過強(qiáng)、色譜峰異常等不必要的故障，浪費(fèi)時(shí)間。
其次，操作人員在配制液相色譜儀分析用待測樣品溶液時(shí)，由同一個(gè)人單獨(dú)完成，以免不必要的偶然誤差從而造成分析的失敗或誤差。
4、液相安裝環(huán)境：
液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開，一個(gè)是防止色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個(gè)是為減少對人體的危害。
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