高效液相色譜儀是進(jìn)行定量分析，雜質(zhì)檢查等分析工作中主要的精密儀器，色譜柱是液相色譜儀的zui核心部件。
在這里，介紹一下色譜柱使用中的注意事項(xiàng)及使用心得。
1、柱頭類型和不銹鋼毛細(xì)管接頭的匹配
色譜柱是消耗品，不是儀器原配的情況很多，如果接頭和柱頭深度匹配將會產(chǎn)生漏液或者死體積過大的現(xiàn)象。
接頭比柱頭深度長，不易擰緊而漏液；接頭比柱頭深度短，柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積，使譜帶展寬和峰拖尾。
2、溶劑的匹配轉(zhuǎn)換
色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑，如果和流動相不匹配，使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)換。
特別是流動村j含緩沖鹽時(shí)，如保存溶劑足純有機(jī)相或有機(jī)相比例高，直接將新柱接人使用，會導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出，造成柱頭堵塞。建議儀器和色譜柱經(jīng)常使用，用10％的有機(jī)溶劑保持即可。
3、流動相及待測樣品的過濾
日常分析工作中，我們使用的流動栩和待測樣品應(yīng)用0．45pm濾膜過濾后再連接或注入到色譜儀上。
對于有機(jī)相比例高的流動栩可以一起過濾出來備用，但是有機(jī)相比例小的流動相一定要現(xiàn)用現(xiàn)濾，分析結(jié)束時(shí)一定要先用10％的有機(jī)溶劑沖洗管路及色譜柱，為有機(jī)相少的流動相容易滋生細(xì)菌，造成色譜柱堵寒，影響色譜柱性能。
4、色譜柱分析時(shí)應(yīng)進(jìn)行平衡和老化
進(jìn)行的方法是運(yùn)行幾次完整的分析程序(包括進(jìn)樣)，直到觀察到峰形、保留時(shí)間和峰面積穩(wěn)定為止。對某些特定的待測物，如分子量大于1000的，閃擴(kuò)散速度慢，老化時(shí)間相應(yīng)要長，可采取大濃度進(jìn)樣或在同一個(gè)洗脫周期內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣多針的方式加快老化。
5、pH使用范圍
一般認(rèn)為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范足2-8，如果選用的是高品質(zhì)硅膠，加上高密度鍵合和雙封尾，使pH耐受范同zui大提高到lO。
注射用頭孢拉定流動村1pH值為8，對色譜柱傷害很大，需要選擇pH值耐受性高的色譜柱。
6、峰形異常
峰形對稱性的優(yōu)劣對峰面積和分離度有很大的影響，從而影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。先檢查樣品足否過載，由于樣品過載引起的峰形后拖不能通過改變色譜條件消除。
如果發(fā)現(xiàn)過載，需降低進(jìn)樣量(包括進(jìn)樣體積或濃度)，進(jìn)樣量越小，峰形越好，例子如頭孢尼西鈉的測定。其次，硅醇基次級保留引起部分峰拖尾。
這種情況發(fā)生，選擇高密鍵合和徹底的雙蜂尾工藝的色譜柱能改善峰形。另外，溶解樣品的溶劑洗脫能力比流動相強(qiáng)會發(fā)生峰前延，所以樣品zui好選用流動相溶解。
7、色譜柱保存
短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相(不含緩沖鹽)保存為佳，以盡量減少下次使用的平衡時(shí)間。
一般只建議在長期保存反相柱的時(shí)候用純醇或乙腈，使用80％左右有機(jī)相保存也屬好的選擇，且足以避免長菌。
強(qiáng)烈建議在柱身上貼標(biāo)簽標(biāo)明保存溶劑。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱，可加0．05％化鈉溶液防止K菌。正相柱無論是短期還足長期，都推薦保存住所用流動相巾。
聚合物基質(zhì)色譜柱具有相當(dāng)強(qiáng)的硬度，有無孔和有孔兩種規(guī)格。該固定相中含有苯基官能團(tuán)，可與待測物發(fā)生疏水相互作用。
與硅膠基質(zhì)的反相填料相比，PolyRP固定相的一個(gè)顯著優(yōu)點(diǎn)是可以在極端pH（1-14）條件下使用，盡管分離效率略有降低。它具有相當(dāng)強(qiáng)的硬度，有無孔和有孔兩種規(guī)格。
該固定相中含有苯基官能團(tuán)，可與待測物發(fā)生疏水相互作用。與硅膠基質(zhì)的反相填料相比，PolyRP固定相的一個(gè)顯著優(yōu)點(diǎn)是可以在極端pH（1-14）條件下使用，盡管分離效率略有降低。
聚合物基質(zhì)色譜柱的安裝：
a、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、按柱管上標(biāo)示的流動相流向，將聚合物基質(zhì)色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。
在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止，切記不要用力過大。如聚合物基質(zhì)色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止。
聚合物基質(zhì)色譜柱主要基質(zhì)的特點(diǎn)：
a.硅膠
硅膠是陶瓷性質(zhì)的無機(jī)物基質(zhì)，剛性大，不易變形。
化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定，但對于水溶液尤其堿性水溶液仍然是不穩(wěn)定的，即使表面經(jīng)過良好的化學(xué)鍵合，覆蓋了固定液，還是要注意水、堿性溶液、酸性溶液對硅膠的溶解作用，基質(zhì)或者說是柱床(packedbed)溶解對色譜柱的影響是致命的。
以聚合物基質(zhì)色譜柱的填料構(gòu)成了目前絕大多數(shù)的色譜柱填料。純硅膠填料適宜分離溶于有機(jī)溶劑的極性、弱極性的非強(qiáng)離解型的化合物，硅膠也可以做凝膠色譜但柱效較低。
聚合物基質(zhì)色譜柱鍵合固定相的高壓液相填料，有其他填料無法比擬的高分離效能。
b.二氧化鋁
二氧化鋁和硅膠相似，但對水溶液、酸性堿性水溶液溶液更加不穩(wěn)定。所以，極少用作鍵合固定相的基質(zhì)，也是適宜分離溶于有機(jī)溶劑的極性、弱極性的非強(qiáng)離解型的化合物，尤其是分離芳香族碳?xì)浠衔?。酸性易離解的化合物容易在二氧化鋁上形成死吸附。另外，氧化鋁分離幾何異構(gòu)體能力優(yōu)于硅膠。
c.聚合物填料
聚合物基質(zhì)色譜柱受壓會變形，壓力限度低但pH使用范圍寬。苯乙烯-二乙烯苯基質(zhì)疏水性強(qiáng)，使用任何流動相，在整個(gè)pH范圍內(nèi)穩(wěn)定，可以用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿來清洗色譜柱。甲基丙烯酸酯基質(zhì)比苯乙烯-二乙烯苯疏水性更強(qiáng)，但可以通過適當(dāng)?shù)墓δ芑揎椬兂捎H水性的。
由于不耐壓、有溶脹性，所以聚合物填料適宜用于大分子像蛋白質(zhì)或合成的高聚物，另外還可以制成分子排阻、離子交換柱。大孔樹脂實(shí)際上主體就是苯乙烯-二乙烯苯聚合物或類似的合成高聚物。
聚合物基質(zhì)色譜柱廣泛用于各種不同基質(zhì)中糖分子、糖醇和其他水溶性物質(zhì)的分離?？梢杂脕矸治鲇袡C(jī)酸及利巴韋林等物質(zhì)，可以用來分離樹膠醛糖、阿糖醇等糖類。
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